Liquid-overlay培养

强少1988 请问细胞培养使用的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) (Gibco)，写文章的时候需要填产品公司，产地，国家这三个信息。大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Invitrogen, CA, USA)，或者写(Gibco, Carlsbad, CA, USA). 大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's M ...

cynthia_rui 求助！！！细胞转到6孔板培养后长得一直很慢，目前贴壁50%左右，能提RNA不？是不是一定要等到长到80%才能提啊？有没有什么具体的操作办法让细胞在胰酶消化时损失小一点？请各位大侠指导，感激不尽！selleckchem01 1，六孔板的细胞长到50%会有点少，不过如果很着急也是可以提取的2，楼主可以用PBS洗掉培养基后，不用胰酶消化，直接在六孔板中加入trizol裂解~zitong1983 selleckc ...

dongfangzhizi06 打算培养成骨向诱导BMSCs，请问：诱导剂是溶于培养基中保存（4度和-20度）呢，还是单独保存每次用时再混于培养基中呢？如果是后者，又该在什么温度下保存？dongfangzhizi06 自己顶一下！ruiteluoshuixiu 我觉得是要单独保存啊，如果混了的话，容易影响效果的dongfangzhizi06 谢谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

尘朵朵 请问用过transwell小室的战友们，你们用它种细胞时的密度+时间是多少啊（加药之前）。我每次也没计数，就是一个25cmXcm的培养瓶，长满之后消化，每个小室种250ul细胞，一共12个小室，长至第二天约16小时。不知道是否太满了？请各位提出宝贵意见哈！先谢谢了！ciliary 你好，我每次都是计数的，养的是HUVEC，每孔细胞数为5×10^4，每孔是100ul，一般测迁移，6-8小时就可以了，我最长做过24小时，觉得 ...

淡墨留痕 我们最近在培养ＨＣＴ１１６细胞，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢五月鱼 你好， 我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。tianyayangg ...

妍会 最近在养HCT116细胞，DMEM+10%胎牛血清，感觉细胞生长状态不好，虽然2天换液，但是培养基里悬浮有很多死细胞，细胞生长缓慢。最主要的，贴壁的细胞中有很大团的东西，又不像是细胞，消化之后，那些大团的东西就成了大泡，比正常细胞大数倍。养了大约2周后发现正常细胞变少了，大泡反而增多了，好像细胞被吃掉了一样。非常想知道是什么原因，不知道这种细胞状态做了转染之后会是怎么样的？急求高手指教！先谢了！zhangshuxi ...

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。(4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比 ...

在细胞和组织培养领域，从上世纪70年代起二维（2D）培养科学家已经看到其局限性，并且更多地关注三维（3D）培养的优点，目前越来越多的研究从细胞培养的平面环境中转变到三维培养。当前，虽然对基于细胞的效应研究和毒性测试中，制药工业如今最常用的依旧是2D方式，3D培养技术已在学术研究中被广泛应用。细胞增殖，分化和代谢等生理活动都严重受到微环境的影响。当前细胞生物学研究大多还是在二维平面培养进行，这种平面培养、生长方式与 ...

胎牛血清是细胞培养常用的添加物， 目前享有盛誉的Life等国际品牌的最好胎牛血清价格飞涨，500ML从原来的3000-4000元涨到现在7000-8000元，给很多科研单位或机构造成了巨大的压力，不管是科研单位还是经销商都费劲心机储备高质量的国际进口血清。然而前期储备的较低价格的进口血清总有用完的一天， 因此国内相关单位非常关注寻求新型的细胞培养基。 但并不是所有的细胞培养需要最高质量的胎牛血清， 而且市场上有些培养基完全 ...

做cell biology实验，细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀： 要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。以前分享的一些技巧：1、一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再，继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆 ...

1、作者：windboy77实验感受：记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好啊，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题啊，大家都是公用的血清，当时我很迷惑，后来我象老师如实反映问题，他听完我的叙述后想了想，让我把培养基拿给他看，然后告诉我，你的培养基颜色太深了，肯定偏碱，细 ...

一、方法根据1999年lutz的方法，做了一些改进，培养DC很多人用的是高浓度的细胞，高浓度的因子，但是这样产量不高，我每一次分离一只小鼠的骨髓，大约可以得到107个细胞，分成10盘，每盘10 ml培养基，用低浓度的细胞因子，这样可以大大提高产量，每次能培养得到undefined107个DC左右，流式细胞术检测：细胞纯度应该大于90%，这个方法还是很好用的。二、具体步骤1. C57Bl/6小鼠2. 处死小鼠，75%酒精浸泡10 min。3. 解剖取出小鼠股 ...

一、实验准备1. 配液：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。2. 取鼠：鼠盆用棉铺好，取鼠。3. 准备：事先检查显微镜、磁力搅拌器及离心机是否好用，提前三小时把小牛血清、胰酶、抗生素拿出来化开。其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。新洁尔灭（0.1％）泡纱布（用10ml5％的新洁尔灭加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分 ...

转自丁香园铁杆站友hjdd原创。养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长 ...

演讲内容： 细胞培养耗材表面的选择 主讲人： 周智优——赛默飞NUNC & nalgene 细胞培养产品支持 主讲人简介： 毕业于暨南大学遗传学专业，获得理学硕士学位。期间主要研究内容为sFGFR2c胞外段对肺纤维化的抑制作用，研究成果发表在Molecular medicine。2011年7月加入赛默飞公司 担任细胞培养耗材产品支持至今。 PPT ...

演讲内容 细胞培养关键技术 1. 细胞培养类型与培养基选择，培养基关键成分和条件确定； 2. 细胞培养表面对于细胞培养的支持； 3. 外环境对于细胞培养的影响（温度/CO2浓度）和污染控制； 4. 细胞培养技术发展。 主讲人 赛默飞培养箱产品经理 陈钺 博士 主讲人简介 陈钺博士，赛默飞培养箱产品经理，毕业于清华大学生物系，获得生物学博士学位。 ...

作者：张韧1 秦玉明2 陈文庆1 刘华杰1 王建超1 高飞1（北京清大天一科技有限公司） 1：北京清大天一科技有限公司 2：中国兽医药品监察所 张韧，1962年出生，男，汉族，北京人，学士，工程师，经理人，zrenty@163.com 【摘要】细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培 ...

作者：张韧，王建超，陈文庆，刘华杰，高飞，徐舸辰，林龙飞（北京清大天一科技有限公司，北京102200） 反应器悬浮培养技术是目前国内外疫苗生产的热点之一，它可以极大提高疫苗的质量和生产率。介绍了该技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状，表明国内该技术目前已经在口蹄疫疫苗生产中获得成功应用，利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中，并将逐步替代传统的鸡胚生产工艺。积 ...

作者：陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧（北京清大天一科技有限公司 102200 ）（《中国兽药杂志》 2010.44 （ 10 ）： 37-41 ） 【摘要】 采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析，比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示，与转瓶培养工艺相比，反应器 ...

由于上次求助无人回应，一气之下遍找资料，汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方，希望能对其它求助兄弟有所帮助。 一、反复冻融法： 1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 2. 至少3次以上冻溶。 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/pos ...