流式细胞术

基本原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annex ...

一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、RNA 含量、蛋白质含量。2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。 二、流式细胞仪的临床应用 1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标 ...

Q:流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？A:FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度 FL2-H是指脉冲高度. 通常在做细胞周期分析时应用 用于去除粘连细胞 Q:流式同型对照怎样选择？A:同型对照(Isotype Control)：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗 ...

1离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，2 加入预冷70％乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保存一个月，个人建议尽量在最短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等最后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去比较保存时间对检测结果的影响）3 细胞染色：离心收集细胞， ...

annexinＶ-FITC(FL1 通道)+ PI（FL2通道）双染细胞，FITC阳性＋PI阴性细胞百％就是早期凋亡％。原理磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力特异性结合。将An ...

一、surface marker染色 1、收获细胞，0.5-1x10e6/tube，用FACS Buffer 2ml洗涤一次，倾倒后滤纸吸干管口液体2、加入预先配置好的你需要染的surface marker的抗体混合液(即CD3CD4CD8抗体mixture）充分混匀，室温下孵育20分钟3、FACS Buffer 2 ml洗涤一次倾倒后滤纸吸干管口液体二、Intracellular Stainin ...

Q:用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊？？tunel测出来的细胞凋亡率大概有30％而作流式测出来的凋亡率只有2％（阴性对照 0.5％）差别好大啊，用的是beckman公司的Annexin V /PI双染试剂盒，实验步骤如下：1，胰酶消化贴壁细胞，加培养基中止，离心1000转 5min2，吸去上清，PBS0.5ml 重悬细胞（因为要送到别处作流式，期间路程约1h，户外温度约37度）3，然 ...

上流式前细胞用75％乙醇固定行吗？Q:我养肿瘤细胞，测周期。看到帖子说70％乙醇必须用PBS和乙醇配，用水配细胞会碎裂，有帖子说PBS和乙醇配会出现絮状物。上流式前细胞用75％乙醇固定，就用买来的现成的瓶装75％乙醇，行吗？必须那么严格吗？A:先用冷PBS悬浮细胞，大约1-2ml，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是：直接加入 ...

一、实验目的 掌握流式细胞仪的工作原理 掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 二、实验原理 流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测 ...

第一篇：流式细胞术的历史 概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。 1934年，Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置计测的设想，在此之前，人们还习惯于测量静止的细胞，因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成 ...

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。 1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。 2、拿出后，1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次 ...

一直有同学在尝试流式检测凋亡，一直有同学在问怎么分析大量似是而非或者一塌糊涂的流式“凋亡”数据，一直有同学指着荧光图里的各种各样的“AP”、“subG1”夸夸其谈。关键问题在哪里呢？我曾经不止一次跟帖阐述过流式检测凋亡的强限制性，但是效果很不好，所以单独开一个说明贴，以后我不再跟帖解释。版主可以考虑置顶，以后有新同学不知道就看 ...

【摘要】 目的 比较流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选肝癌亚群细胞的效果。方法 原代培养肝细胞癌细胞，分别以流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选ckit+肝癌细胞，然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度，计算回收率；以台盼蓝检测细胞活力，CCK8法检测细胞增殖能力，裸鼠移植测其成瘤率，并进行统计学分析。结果 流式细胞仪分选所得到的ckit+肝癌细胞纯度、回收率最高，与其他两 ...

【摘要】 目的 建立健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的正常参考值。方法 采用流式细胞术，通过四色荧光标记，在绝对计数管（TruCount tube）内进行T淋巴细胞亚群的检测及绝对计数分析。结果 健康儿童T淋巴细胞（CD3+细胞群体）占淋巴群体的百分率为(65.16±7.05)%，绝对计数为(2029.75±718.85 ...

【摘要】 目的 探讨应用流式细胞术(FCM)检测恶性肿瘤病人外周血淋巴细胞多项免疫指标的变化及该指标对恶性肿瘤免疫治疗前后的临床价值。方法 采用流式细胞术检测50例恶性肿瘤病人和31例健康人的外周血CD3、CD4、CD8等八项免疫指标变化，并且对其中10例病人应用免疫制剂治疗前后对抗原表达的结果进行比较。结果 恶性肿瘤病人免疫功能紊乱：(1)细胞免疫 ...

细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。 下面是一幅凋亡过程图。在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f－1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激活，磷脂酰丝氨酸外翻，这时细胞的形态已经发生了改变，可以看到细 ...

细胞类别 MACS分选产品 流式细胞仪抗体 干祖细胞 ...