流式细胞术

B细胞的抗原识别信号转导的启动 静止状态时，Src家族的PTK如Fyn、Blk和Lyn通过酰基化与膜脂结合而附着于细胞膜内侧，因成簇和相互磷酸化而激活后，首先使结合于BCR的Iga／Igp分子胞内段上ITAM中的酪氨酸残基发生磷酸化，磷酸化的ITAM招募各种带有SH2结构域的蛋白质分子，首当其冲的是带有两个SH2结构域的Syk-PTK分子。Syk与T细胞中的ZAP-70一样，都属胞质中游离 ...

B细胞激活信号的胞内传违 膜结合的衔接蛋白是连接淋巴细胞激活信号胞内传递的重要成分，T细胞中为I-AT．B细胞中称为B细胞连接蛋白(Bcelllinkerprotein，BLNK)。前面提到，游离于胞质中的Syk-PTK被招募并激活后，其作用的靶分子之一，即是含SH2结构域的BLNK，并通过BI。NK构筑的“平台”，吸引并进一步激活多种信号分子包括蛋白激酶和其他衔接蛋白，Tec-PTK家族 ...

流式细胞仪术检测各类免疫细胞的数量 流式细胞术（FCM）是一种高速度、高灵敏度、高精度和高分辨率的自动分析细胞的高新技术。主要用于定量分析单细胞表面、细胞内抗原和对分子水平的核酸含量的测定。【试剂及材料】（1） FITC（或PE）标记的抗CD的mAb及正常小鼠IgG（2） 细胞洗液：含2%BSA、0.1%NaN3的PBS。（3） 固定液：2 ...

流式细胞术在组织化学与免疫组织化学中的应用 流式细胞术(flow cytometry，FCM)是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。该技术是一项集激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学、免疫荧光细胞化学技术及单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。概括地说，流式细胞技术是通过流式细胞仪(flowcytometer)对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速 ...

流式细胞术数据处理与分析 数据的显示通常可分为一维单参数直方图(histogram plot)、二维点图(dot plot)、二维等高图(contour)和假三维图(pseudo 3D)等。下面简述最常用的单参数直方图和二维点图。 1．单参数直方图 单参数直方图是一维数据用得最多的图形，可用来进行定性分析和定量分析。横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，其单位用“道数”(c ...

ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT 酶联免疫斑点法）：是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术，是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型技术。使体外检测各种细胞产生细胞因子及细胞分泌抗体研究有了新的突破ELISPOT技术优点：1. 特异性和敏感性高：能从 20万-30万 细胞中检出 1个 分泌该蛋白的细胞 ...

ELISA实验质量控制问题说明

A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）： (1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。 (2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。 (3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5m ...

摘要：目的 建立人外周血 CD34 +细胞及其亚群的纯化分离方法。方法 用干细胞采集仪收集了3例病人的外周血干细胞，应用免疫磁珠分离柱快速分离其中的CD34+细胞，随后采用分选型 EPICS Elite 流式细胞仪进一步分选出CD34 +/ CD90 +双阳性早期造血干细胞。结果 免疫磁珠分离纯化后CD34 +干细胞的纯度可达83%～95%，回收率54%～71%，活细胞率 ...

流式细胞仪(flow cytometer，FCM)是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论、细胞荧光化学技术及单克隆抗体技术于一体，被誉为实验室的“CT”。 流式细胞术则是一种在功能水平上对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的 ...

丁香园网友lidm的问题为： 我要分析骨髓间充质干细胞的表面抗原，以分析我提纯的细胞是否有许多造血干细胞和成纤维细胞。请赐教！ 丁香园网友schoman的回答为： 骨髓间质干细胞的检测并不难，只要有荧光标记得抗体，操作非常容易，但是，对于骨髓间质干细胞的特异性标记我并不熟悉，请查找专业的文献，然后，按生产公司定购产品即可。 丁香园网友doctormeng的问题为： 流式与westen在检测蛋白表达 ...

gzgygy Microtubule Disruption and Tumor Suppression by Mitogen-Activated Protein Kinase Phosphatase 4，是2007年11月15号发表在Cancer Research上的一篇研究论文。我们的研究生在阅读过程中看到了其中的疑问，过来求证。经过讨论，我们认为这篇文章包含了严重的实验失误，于是先和文章的通讯 ...

混合淋巴细胞培养(MLC)或称混合淋巴细胞反应(MLR)常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化，因此又是免疫调节研究中常用的实验模型。　　(一)　实验原理　　两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLAⅡ类抗原 ...

Q：流式图画十字mark时的依据是：该管的同型对照？还是细胞分群？ 结果查到2005年的nature上一篇文章是按群分析的，一篇1995年的science是按同型对照来的 nature的图发上来吧，请老师看看！FIGURE 1. Identification of subsets of CD4+ and CD8+ T cells in a non-human primate (rhesus mac ...

一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。2．打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－1 ...

早在1986年Mosmann等依据小鼠分泌的细胞因子谱不同首次将Th细胞分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等细胞因子，介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏反应。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10和IL13等细胞因子，其主要功能为刺激B细胞增殖并产生抗 ...

在基因功能研究过程中，常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达（transient expression），以流式细胞仪检测细胞周期的变化，观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同，转基因的效率也不同，往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因，没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测，是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表 ...

凋亡都比较多，但遗憾的是与G1峰分得不是很开，因此，Modfit分析的时候，会根据您的结果用统计学原理将它们分为Apo和G1，但这样可能掩盖真正的结果！建议做PI染色的时候，在PBS洗两次后，加入PC buffer，这是一种轻破膜剂，可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值，这样就容易区分G1和APO了。 对照很好，特别是 ...

Q:我现在做肿瘤细胞内ROS水平测定，使用流式细胞仪测DCF荧光强度，应该用什么做对照呢？就是这种肿瘤细胞的正常细胞做对照吗？可不可以用任意的正常组织细胞做对照呢？或者只用PBS加DCFH-DA作为空白对照呢？ A:据我的经验，DCFH-DA本身没有荧光，可穿过细胞膜进入细胞，在胞内转化生成DCFH。在活性氧作用下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。你是要测定细胞 ...

活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针 DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH- DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH不能通透细胞膜，从而使 探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性 ...