原代培养

HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒培养等方面的研究研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性，还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌细胞培养的最佳条件做一简单综述。 1、HepG2细胞的复苏条件 （1）复苏温度的选择 唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏：快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解，溶解后马上转入 37 ℃水浴箱，手工 ...

丁香园网友roseluo425的观点为： 1、0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化 2、消化前后一定要轻柔吹打 3、重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次） 4、种板密度要合适 5、当然血清，板都要进口，别图便宜 6、别忘了检查CO2温箱的情况 丁香园网友ljm123的观点为： 1、首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的以我的经验来看活力是较好的皮肤看起来是暗红色的再大一点的话皮肤变厚变 ...

纯化病毒第一步 剪碎法CEF的制备 实验前准备 PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基 实验步骤 Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室 Ⅱ 准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出， ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

PC12是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系属神经嵴源性具有神经细胞特性. 由于具有分化型和未分化型两种形式因此很多朋友包括我本人在内都困惑过做实验时应该选择哪种类型? 根据最近查到的资料发现无论分化型还是未分化型都可以作为神经细胞来使用分化型的PC12可以看待为成熟的神经元因为无论形态还是生化特征都与神经细胞类似.而未分化型PC12可以看待为未成熟的神经元. 值得注意的一个问题是关于PC12培养液的使用 ...

一、常规的试剂配制： 1、培养基：选用高糖型DMEM/F12 (1:1)培养基干粉（含15 mmol Hepes），每升培养液中加入碳酸氢钠1.8 g，调节pH值7.0，0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后，加入谷氨酰胺、无菌的青霉素和链霉素液，使其终浓度分别为0.5 mmol/L 、100 U/ml和100 μg /ml，分装后置于4℃保存，临用前加入2%的B27。神经细胞代谢旺盛，选 ...

大规模培养哺乳类细胞是生产许多临床和医学上重要生物制品的一种有效的方法，这些生物制品包括疫苗、干扰素、激素、生长因子和单克隆抗体等，推动了生物学和医学的发展，给医学卫生事业带来了巨大的社会效益和经济效益。基因工程技术、细胞工程技术，以及新的细胞大规模繁殖培养系统的发展，是构成上述成就的主要原因。然而，体外大规模繁殖真核细胞要比原核细胞困难得多，如细菌、酵母菌和霉菌的细胞壁厚，能耐受搅拌，不易破碎， ...

培养基 1、关于培养基，如果不是买液体的，那么其ph问题一定要给予充分重视！配置过程中的调解我就不说了，能用ph计最好！ 2、关于培养基的保存，如果你有输液瓶，那么我建议你每一次打开以后，最好还是换一个胶塞。如果象我一样就是普通培养瓶，那么记得一定要用封口膜封口，不要担心封口膜会带来更多的污染！你可以先将封口膜在使用前开紫外时略微照一下！但是保存封口膜最好找一个密封的瓶子等，比如吃完糖的罐子。 3 ...

问：我手上现有冻存的小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块，请问怎样把癌细胞分离出来培养，然后接种到小鼠身上？ 答：方法： 1、组织块——酒精浸泡——剪碎——Hank's冲洗——胰酶消化——离心——Hank's冲洗——离心&mdas ...

一、准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。 1、清洁、消毒、液体 直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子 直接接触细胞的用品要彻底消除微生物 超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间 ...

1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM） 2、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研 ...

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后能保持结构和功能上的某些特点 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免 ...

1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体 ...

1、原代培养： 健康成年白家兔空气栓塞处死立即取出眼球1∶1000庆大霉素生理盐水冲洗干净置超净工作台无菌操作。角膜缘剪开去除角膜、虹膜将晶状体前囊膜连同赤道部囊膜撕下Hank液冲洗剪成1mm×1mm小块上皮面向下置25mL组织培养瓶内贴壁培养。把培养瓶轻轻翻转加入适量的加入含15%胎牛血清的DNEM营养液囊膜片在瓶内的上面而培养液在下面。置于37℃、5%CO2、95%空气、100%湿 ...

材料与试剂： 镊子、剪子、培养皿 离心管、培养瓶、吸管、滴管 200目筛网 胶原酶（10ml）（20mg胶原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升双蒸水）国外也用培养基配. 方法： 1、取无菌条件下新鲜切除的人腹部皮下脂肪组织约5－10克，放入培养皿，用1×PBS冲洗2－3次，充分洗去血污，剔除结缔组织和可见血管。 2、充分剪碎脂肪组织为1mm×1mm的小块。 3、将其加入到 ...

材料与方法： 材料 : 培养皿、培养瓶、烧瓶、试管，玻璃针等。 眼科剪、眼科镊、手术刀片。 5%CO2孵箱、PH计。 恒温水浴箱。 PMi1640培养基，D-Hank’s缓冲液 、胎牛血清，内皮生长因子（ECGF），青霉素，链霉素戊巴比妥钠等。 方法： 1、取材：4～6ｗＷｉｓｔａｒ大鼠 大剂量2%戊巴比妥钠麻醉处死，将处死后的大鼠浸入75%酒精中，放入超净台。在无菌状态下剪开胸腹腔 ...

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20% ...

1. 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含 ...

This protocol describes a method for the transformation of lymphoblasts by Epstein-Barr Virus (EBV). Cells may be isolated from whole blood or taken from cryopreserved non-immortalized stocks (please ...

本人具有数年的细胞培养经验，期间经历了无数次的失败和成功，回想起来有苦也有甜，现在把中国疾病预防控制中心和我自己的经验结合起来，制作成MDCK细胞培养SOP，欢迎大家参阅： 一、目的 MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。 二、适用范围 适用于疾控中心所有技术人员 。 三、程序 （一）生物安全要求 实验室生物安全级别： ...