原代培养

“长白猪精原细胞的分离和纯化”：实验动物：长白种系公猪，2月龄，由北京养猪中心苇沟现代化猪场提供。取活体睾丸，立即放入1640营养液中，待分离细胞。

凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性，细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L,培养基可用Eagle（MEM）或DNEM培养，小牛血清浓度为10%~80%。在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮。

消化培养法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24h。

细胞培养的操作视频。

动物细胞培养开始于本世纪初。1962 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等, 已成为医药生物高技术产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的50% 。动物细胞大规模培养技术是生物技术制药中非常重要的环节。目前, 动物细胞有悬浮培养和贴壁培养.技术水平的提高主要集中在培养规模的进一步扩大、优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率与保证其质量上。

细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些 ...

细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些 ...

细胞的原代培养

动物细胞培养开始于本世纪初1962年，其规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法。

一、试剂和缓冲液配制 1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶） （1）解冻胎牛血清 （2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶） （3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏 （4）在-20℃冰冻馏份 2、磷酸盐缓冲液（PBS） （1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术） （2）900ML蒸馏水 （3）2克葡萄糖 （4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在 ...

一、有限稀释法 材料： a、96孔细胞培养板等； b、HT培养基； c、活力强的杂交瘤细胞； d、小鼠腹腔细胞。 方法： a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。 b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。 c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤 ...

实验步骤 （一）、取SD 大鼠一只，实验时断椎处死。 （二）、在无菌条件下快速自肛门上2cm 取结肠10cm 左右，生理盐水中反复灌肠冲洗。 （三）、移入含300U/ml青霉素、300U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡，肠段内外各15min。 （四）、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中（培养板预先铺上705胶），在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行 ...

PC12传代的消化 丁香园wangpengljr的问题： 我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ...

丁香园ivy_mayan的问题： 在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？ 丁香园george的观点： 1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。 2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： 未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？ 丁香园sudajyou的观点： pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。 丁香园忘记宝儿兔兔的问题： 关于pc12细胞即鼠 ...

丁香园myl0605的观点： 前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助! 培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。 分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ...

取一个注射器针头， 针头头部都会有一个斜面，把针尖背对斜面的一方弯曲成90度，记住只是针尖部位，形成一个小倒刺状。取爬片的时候把培养板放倾斜，可在板子下支一个东西，左手拿小镊子，右手拿针头。用针头头部弯好的倒刺，去勾爬片，很容易就会勾起来，而且不会伤片子。再用镊子把片子夹出来。速度比原来提高很多，取一个板子的爬片只要一分钟。 说的不是很清楚 画张图给大家吧 ...

丁香园网友kj7156084的培养方法： 本室的PC－3来自上海细胞生物所，种是ATCC的。 以10％FBS＋1640或F12培养，0.25%胰酶消化。塑料瓶或玻璃瓶都可以，当然，前者效果较好。复苏时最好用塑料瓶。 5－7天传一次（1：2），2－3天换一次液。尽量高密度传，因为PC－3细胞喜欢扎堆长，如果过了两三天细胞长得不均匀，可以消化离心一下。 传代后一到两天不要动它，要有耐心。 人前列腺癌 ...

丁香园网友yql1977的问题： 各位朋友，今天跟我师弟讨论一个问题，神经元OGD时是否要将缺氧液配成酸性的，我认为酸中毒和高钾血症等并发症是机体缺血后造成的后果，因此不必人为制造酸中毒，而且关于神经元OGD的大量文献也没有特意提及缺氧液的PH值。而我师弟认为在体情况下缺血时会伴有酸中毒及高钾血症，因此造模时应该造成酸中毒甚至高钾的环境，不过他做的是心肌，关于心肌的文献大部分都说明缺氧液PH在6. ...