原代培养

1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是 ...

南国小医 近两周SD大鼠的海绵体平滑肌细胞的原代培养老是感染细菌，早上还是好的，到下午就感染了，因为是新手，求一些更详细的操作注意事项，或者一些可以避免的小窍门。万分感谢dachong99 1. 检查培养箱和培养基，可将空白培养基在培养箱中培养来检查。2. 具体手术器械、操作者、操作环境等。这个环节比较多，需要一一排除。建议严格按照protocol进行实验。南国小医 但是我和师兄两个各自培养原代的，师兄是好的，他也是在旁边监督我全程操 ...

暮色英雄 我是用无血清NB培养基+EGF+bFGF+B27+p/s双抗的培养基培养的胃癌原代细胞，培养基已经用0.22μm过滤器过滤除菌，但是培养细胞之后出现很多小颗粒，不知道是什么东西，这照片是昨天照的，今天再观察的时候这些小颗粒已经长满了，我师姐帮我看了说是污染，然后我把细胞倒掉了，但是她也不知道这是什么污染。希望各位大侠能帮小弟看看这到底是不是污染，是什么东西？谢谢了这是20x镜拍的ecust小熊 真菌污染吧？双抗无 ...

bahai 各位老师好，最近在做阴道壁鳞状细胞的原代培养，一直不见起色，培养不成功，情况就是没有任何细胞长出来，特来请教大家。看了好多文献，看了很多细胞培养的资料，咨询过很多同学，然后做了多次，都是没有细胞，呵呵现在有这么几个问题：1：培养基的选择：文献中都说用的是K-SFM培养基，我现在是用了K-SFM培养基和DMEM/F12两种培养基同时做，希望对比一下两种培养基的情况。结果都是没长出来，DMEM/F12时，24小时候， ...

紫色云龙 本人初做细胞，想各位大虾多多指教。不胜感激。目前的课题做wista大鼠肾上腺细胞原代培养，（也可以做人肾上腺细胞，可以买的到，考虑到没有经验，加上大鼠肾上腺提取也可以做）。试 剂：hank‘s缓冲液（漂洗用），培养基【DMEM/F12，gibco胎牛血清（用10%），双抗（青链）（用1%）】，胰酶（用大概0.1%），胶原酶1型（用0.1%），透明质酸酶（未到货）主要仪器:常规东西（枪头，酒精灯，打火机等），3套取材器械，400目不锈钢网筛，5 ...

一光年 最近要做生殖的细胞方面的实验，前期一直用在垂体细胞原代培养，但是一直困扰没有促性腺激素细胞系，但是在网络中搜索，发现老外的文章中经常提到αT3-1，LβT2 或LβT4细胞系，在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系，不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系？不甚感激！！veimojie 我一直也在做这方面的研究 什么地方能有啊 ？banana_smile 我也想做这方面的研究，恳请知道的大虾告之beastjane “一光年 ...

今天我想跟大家分享关于肝细胞选择的一些技巧，希望大家的研发之路可以走的顺利一些，搞科研不容易啊。1.如果你的实验室之前没有成功分离肝细胞的经验积累，建议大家还是不要尝试了，这个的确不太容易分离而且肝细胞的冷冻复苏里面有很多的技巧，一时半会儿很难掌握（我们有客户花了8个月的时间，最终还是失败了），因此如果自己分只会浪费更多的时间。2. 如果经济条件许可最简单的就是选用贴壁肝细胞。贴壁肝细胞比悬浮肝细胞的质量更高具体表 ...

每天孝敬细胞比孝敬爹妈还用心，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?　　早走早脱身，从此专注黑生物 1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。　　2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。　　3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。　　4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。　　5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。　　6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在 ...

1、首先说清洗：对于玻璃器皿（如移液管、盖玻片之类）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24h。之后用清水将移液管冲洗10遍，除去残留酸液，再用双蒸水冲洗3-5遍，彻底洗净后放入不锈钢筒中，双层牛皮纸扎口，高压灭菌20min，烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液（重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL）配液时要小心烫伤。装培养基的瓶子则要在每次用完培养基以后就要立即洗净，临用时再次用清水冲洗3-5遍，再用双蒸 ...

很多实验者都不bother自己洗手，酒精一喷就去实验了。我告诉大家，这是极端错误。个人经验是，你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精。有人穿半截袖的白大褂去做实验，每次我看到都想骂。白大褂袖口要长，最好是袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那 ...

树突状细胞培养操作步骤准备补充剂将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后，把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子，轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B，它们都是以100X 的原液状态运输的。注意：此时不要将化合物B加入培养基中。DC基础培养基不带细胞因子，因此使用时必须另外自行添加。新鲜分离的单核 DC 细胞的传代对于新鲜分离自 ...

PromoCell MSCDXF培养墓的主要特点：1、适用于骨髓/脐带/脂肪来源的MSC；2、在更短的培养时间内细胞扩增更多；3、细胞倍增速度更快；4、操作简便，基础培养基和补充剂一次性混合后，即可实现培养；5、更低的接种密度， 4000个细胞/cm2；6、在细胞传代的整个过程中，都可维持免疫表型、多能性及对T细胞的抑制能力；7、无血清、无动物源性，成分已知。优点：1、精确控制MSC的类型，自我增值或定向分化2、更低的使用成本3、降低 ...

PromoCell的人类心肌细胞（HCM）分@自成人心B的心室。该组织来源于正在进行心脏移植的患者的外植心脏。a）当一T大V本的心肌进行了灌注和4完全消化-，会分@bcdf的心肌 细胞。gh一i细胞会自发进行常n的p缩，sgt一iu只w受cy激-才会p缩。由于gp缩功能，它们通常能用于生理研究。然s，wn律的肌节排布，会阻止大多数的细胞附着cTC培,皿上，因此，t们在体外是无法生长的。b）s另外一9情况下，当成人心肌进行的 ...

第一就是要稀释。我们要留血浆（肝素钠抗凝的采血管采的血，5～6ml），所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水，一般3ml左右，混匀。第二，分离液不在乎体积有多少，主要是高度，如果离心管很粗的话（呵呵，挺吃亏的），就要多加一些，细一点的离心管就可以少加一些，一般高度要超过3cm。第三，看你要分离的血是什么来源的，成人外周血比较好分，脐血和胎盘血不好分。当然，发生溶血和凝血的话就更难分了。第四，血的保存很重要，采血后不 ...

一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高细 ...

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样，你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确的使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？请看丁香园资深站友总结的「细胞培养板的选择」。细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U 型和V 型）；培养孔的孔数有 6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有 Terasaki 板和普通细胞 ...

版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很 ...

1、称体重：2、腹腔内注射苯巴比妥钠50ｍｇ/kg将大鼠处死,用酒精严格消毒大鼠下颌至全腹皮肤及鼠毛,剪开下颌至中腹部皮肤,打开腹腔,推开肝脏并分离出肝及膈肌间的下腔静脉并给予切开放血。3、肺血管灌洗：分离并部分横断切开气管,插入连接有10ｍｌ注射器(内装ｐＨ7.0ＰＢＳ)的灌洗管并用细线加以固定,在固定的离心段剪断气管,剪开肋骨并打开胸腔将肺和心脏提出胸腔。用20号针(另一端连接20ｍｌ的注射器)穿刺进入右心室并顺 ...

1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分 ...

版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很 ...