基因转染

腺病毒（adenovirus，Ad）最初由W. P. ROWE等人在人腺样体中分离得到并命名，这是一种直径为70-100nm、无包膜的双链DNA病毒。目前已知的人腺病毒血清型有50多种。其中基于人腺病毒5型（Ad5）改造的载体使用较为广泛，其特点是人为地删除了E1和E3基因，导致腺病毒失去复制能力和一定程度上降低免疫原性，使得Ad5成为一种广泛、安全、有效的基因运输载体。根据重组腺病毒的特点，我们继续了解腺病毒在不同领域中 ...

做了 5 年的 MTT 实验 ，耗费了上万块 96 孔板。有成功的喜悦，有失败的沮丧，有好多话要对各位实验同仁说。在这之前，我们先回顾一下 MTT 的原理及操作步骤。实验原理MTT 是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下，生成蓝色的 formazan 结晶。formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将 MTT 还原，无法形成结晶），且该结晶溶解于 DMSO。利用酶标仪测定波长 490 nm 处的光密度 OD ...

CRISPR：细菌体内一串规律成簇的间隔短回文重复 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)DNA 序列，是大多数细菌及古细菌中一种获得性免疫系统。现在使用的 CRISPR/Cas 9 系统是由最简单的 type II CRISPR 改造而来，该系统由单链的 guide RNA 和有核酸内切酶活性的 Cas 9 蛋白构成。原理此系统的工作原理是 crRNA(CRISPR-derived RNA) 通过碱基配对与 tracrR ...

doctorchihlee 大家好，请问一下空白载体（含GFP,但不含靶基因）成功转染哺乳动物细胞后，荧光显微镜下观察GFP，观察到细胞全部呈绿色还是仅仅外周发光或是核发光？谢谢！doctorchihlee GFP在细胞质，是全部发光？！？real_madrid_146 这个是我用pEGFP-C2转HEK293的图。shylook 就是这样的济南基美 全部发光，GFP由于比较小，会有部分可以进入细胞核，有文献报道过本文由丁香园论坛提供， ...

happy0coral 哪位大侠能告诉我用pre-miR转染是属于瞬时还是稳定转染啊，另外是不是只要是转染就叫miRi啊sxj_fish 很多基因都是可以转染的　，ＤＮＡ也可以转染，还有ＳＩＲＮＡ也是可以转染的芍药香 可以选用瞬时转染也可以选用稳定转染，不过现在microRNA的前体转染大多是瞬时的。转染只是实验方法，应用于多种核酸的转入。artneer pre-miRNA是属于瞬转，因为转染miRNA的成熟序列很多情况下效果 ...

linjl010 各位专家，我构建了一个表达载体，大小接近9K，目的是想验证猪的该基因表达情况，所以可以转染哪几种细胞，希望用一种转染效率高的细胞。谢谢大家！shylook hela咯章信来 293也成的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

chenlimei518 请教各位老师们：本人今天上午9：00做慢病毒转染肠癌贴壁细胞（SW620、HCT116），结果今晚6：00去换液观察一下细胞，其中有几个孔细胞死了很多，仅在孔边缘存活几个，有些孔细胞比较多。请老师们帮忙指导。谢谢！具体步骤如下：慢病毒包装：一、1D接293T细胞于6孔板中，undefined10 6/孔二、2D采用3质粒系统包装，12小时换液（1640+10%FBS）三、36小时收病毒，用0.22mm过滤，备用转染SW6 ...

chenguooo 各位大侠，小弟马上要做慢病毒尾静脉注射，想转染肝脏血管内皮细胞，想知道一只BALB/C小鼠要注射多少量？转染效率有多少？查不到类似的文献参考体内肝脏血管内皮好转吗？我的慢病毒滴度是undefined108TU/ML，来自上海英为信公司。谢谢！zhujoker 慢病毒滴度是undefined108TU/ML 打活体滴度太低，效果可能不会好chenguooo 我准备一只打300ul，那么一只就是1.undefined108TU，滴度再高的话，公司说滴度再高的 ...

lsdcfhyj 想请教大家，在我研究的信号转导通路中，转录因子要形成二聚体转移到核内与调控序列结合启动后续目的基因的表达，报告基因质粒含转录因子调控序列和荧光素酶基因，我在想如果用瞬时转染的话，那么质粒只在细胞质之中，并未整合到核基因组中，转录因子又必须是要转入核内与调控序列结合启动荧光素酶表达的，那瞬时转染质粒的细胞能用于报告基因分析吗？woxingwosu 用瞬时转染是可以用来做报告基因分析的，这类的例子不在 ...

lsdcfhyj 将报告基因质粒转染到癌细胞中，是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆？很多文献是这样做的，可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因，为什么还要共转染另一个抗性质粒？一直对着个问题很困惑，请懂这方面知识的前辈指点指点？还有就是质粒使用量的问题，我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适，看了很多操作步骤，有的一个六孔板一孔就要用1到2微克，可是商家产品就有1微克 ...

lsdcfhyj 请教前辈，将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的chenjing198345 如果lab经费充裕的话可以用试剂盒包装慢病毒，然后感染真核细胞，完全按照protocol做就行，没啥特别的，sbi的kit不错。如果经费有限，一般是用磷酸钙转染法，这种方法在《分子克隆》里面有介绍，缓冲液的ph值很关键。lsdcfhyj 谢谢，但是我看很多外文 ...

dachouchou 请教各位分子生物学的高手。现在在一个细胞里有蛋白A，没有蛋白B。问题是：我想要蛋白B，而不想要蛋白A。是否可以通过基因转染导入B。那么导入B后，可否在这个细胞内再使用分子生物学技术去除A？如果可以，使用什么技术？toddy99 The esaiest way is using RNAi against A.Though you can also generate A knock-out, it is quite slow and difficult.I will suggest you ...

角色方向 我想问一下，基因转染是什么意思啊？例如Apt6i转染脊髓基质干细胞 能否详细解释一下？多谢！freecell 基因转染，通俗地说就是将核酸分子导入细胞。说得学究一点，就是将具有生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。小舟儿 补充一点，我个人理解是：1.转染是把目的基因转入靶细胞（真核细胞）后，进而研究该基因功能的一种常见方法。2.与此过程相似的一个名词“转化”——把目的基因转入原核细胞后，进而研究该 ...

chenke520520 本人做转染实验，由于小鼠的细胞实在是养不活，我能否将小鼠的insig-1基因（insulin induce gene-1）转染到大鼠细胞中？能否其发挥功能？急！请战友们解答！谢谢！shao74 可以。你是需要稳定表达还是瞬间表达？若稳定表达，你可采取病毒感染的方式，如曼病毒；逆转录病毒和腺病毒；若后者你可用一般的转染方式就够了，这样一般可持续7天左右。hustokyo 不同种属的基因和细胞，外源基因表达出的蛋白 ...

wywdxfsh 经常看见文献里提到这2个单词，我没搞明白，举个例子，比如我用lipo2000转染一个质粒，在设对照的时候，一个孔只加Lipo2000，一个空什么也没加，那这两个空分别叫什么呢？先谢过走过路过的xdjm，更谢谢留言回复的同志！：）freecell NC: non-specific control，非特异性对照 ，例如你的问题中的“只加Lipo2000”，以探讨某种效应是否由转染试剂影响的。mock: 空白对照，例如你的问题中的 ...

river33617 大家好，学生我最近做悬浮细胞的转染。转染入对照质粒的细胞生长正常，但表达目的基因的细胞渐渐成团生长。初步考虑是该目的基因激活了黏附因子的表达，请问高手们这些黏附因子有哪些啊？ 如果能提供一两篇综述就更感激了。谢谢。river33617 顶一个，继续求助，谢谢了。jing3324 做个芯片去GO分析，这样还能有很多意外收获。lwjssry 这个课题非常有意思啊river33617 lwjssry wrote:这个课题非 ...

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中（参见表6了解建议的细胞密度）。2. 对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批 ...

看到这篇文章，非常的详细，和大家分享一下。由于内容比较多，编辑不是很方便，也上传了附件供大家下载。如果觉得有帮助记得投票或者顶贴哦！基因芯片 1什么是基因芯片 生物芯片，简单地说就是在一块指甲大小（1cm3）的有多聚赖氨酸包被的硅片上或其它固相支持物（如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基（视所要固定的分子为核酸或寡肽而定）并与保护基建立 ...

脂质体转染目前仍然是基因重组中主要的应用方法，虽然并不复杂，但问题也有不少，这里将DXY的有关资源总结如下：脂质体转染方法脂质体转染常见问题与解决http://www.dxy.cn/bbs/thread/1709497http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710130http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710363http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710381h ...

转染求助http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/204073_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/719072http://www.dxy.cn/bbs/thread/1153373http://www.dxy.cn/bbs/thread/501069http://www.dxy.cn/bbs/thread/1479097共转染问题http://www.dxy.cn/ ...