DNA制备

Serial Analysis of Gene Expression (SAGE)SAGE is a powerful tool that allows the analysis of overall gene expression patterns with digital analysis. Because SAGE does not require a preexisting clone ...

Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) by (DNA KAFFE)RAPD analysis has been successfully used in mapping and fingerprinting applications. RAPD can efficie ...

Serial Analysis of Gene Expression (SAGE)SAGE is a powerful tool that allows the analysis of overall gene expression patterns with digital analysis. Because SAGE does not require a preexisting clone ...

DNA Fingerprinting (David F. Betsch)the theory procedures and applications ・ DNA Fingerprinting (Polyarylamide Gel) (Caltech)BAC DNA sample and gel preparation gel running and more ・ ...

利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针1. 在一个0.5 ml的薄壁微量离心管中设置下列扩增/放射性标记反应体系：10×扩增缓冲液 5.0μl10 mmol/L dNTP溶液 1.0μl0.1 mmol/L dCTP 1.0μl20μmol/L 正向寡核苷酸引物 2.5μl20μM反向寡核苷酸引物 ...

核糖核酸探针1．室温下，于1.5ml无菌微量离心管内依次加入：5μl 5×转录缓冲液1μg 模板DNA1.2μl 10 mmol/L rATP（终浓度为480μmol/L）1.2μl 10 mmol/L rCTP（终浓度为480μmol/L）1.2μl&n

放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交1. 将含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸湿。将膜浸于溶液中2 min。2. 用下列方法之一进行预杂交在热密封的袋中进行的杂交a. 将膜塞入热密封袋中（如Sears Seal-A-Meal或相应设备），按每平方厘米0.2ml加入欲杂交液中。尽量将袋中的空气挤出。b. 用热封口 ...

用于检测植物组织RNA的原位杂交法（一）组织切片制备l 植物组织的甲醛固定和包埋1．将植物组织切成小块，立即放入一个装有10～50ml固定剂溶液的烧杯中，把烧杯放到真空脱水机内。调节真空度以形成一个温和的真空，然后慢慢恢复常压。微量便于固定剂渗入组织，必须反复真空和非真空状态。待固定剂充分渗入组织块后，室温下放置2～3小时。2．室温下用50～100ml 50mmol/L PIPES缓冲液 ...

确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质，“撒大网”l 双杂交和其他双成分系统第一阶段：诱饵-LexA融合蛋白的鉴定诱饵-LexA融合蛋白的构建1．将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的质粒作为pBait。2．采用下列LexA融合基因和lexAop-lacZ报道质粒的组合，建立一系列E ...

　　　　我们描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区。 这种反向PCR方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序列，还可应用于制备未知 ...

　　　杂交反应的条件类似于传统的Southern或Northern杂交。具体的选择视研究目的而定，例如，进行多态性分析或杂交测序时，要求能够区分单个碱基的变异，所以需要较高的杂交严谨性；而用于表达谱检测的芯片为了提高检测的特异性、保证较高的灵敏度，需要较长的杂交时间，高的严谨性、高的样品浓度、较低的杂交温度等。同时，杂交反应还必需考虑反应液中的盐浓度、探针序列的G+C含量、探针所带电荷情况、探针与 ...

Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci Yale University Resuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et al. Nucleic Acids Research) has several benefits o ...

Preparation of LB Plate (Dr. Chastain)prepare LB plate with or without antibiotics Bacterial Culture Media Recipes (WUGSC) M9 Plate Supplement (Gottschling Lab) Bacterial Media Solutions and Stock ...

DNA Extraction・ DNA Extraction from Bacteria (Julie B. WolfUMBC)Phenol/chloroform method ・ DNA Extraction From Bacteria (Triton Method) (NWFSC)Isolation of Chromosomal DNA from Bacteri ...

The Construction of Bacterial Artificial Chromosome (BAC) Libraries (complete manuscript) (Clemson University Genomics Institute) Construction of BAC Library (Caltech)Guideline for BAC library prepa ...

Phagemid Related Protocol (Erik)provides procedures for phagemid lysate preparation titering phagemid determining uracil incorperation and SS DNA preparation Preparation of Single-stranded DNA (OGM ...

・ M13 Phage (Michael Blaber)Very useful background information about M13: its infection replication packing cloning. If you are new to phage culture it will be great beneficial to read this.・ ...

Preparation of HeLa Nuclear Extract (John Garland) ・ Extract Preparation (Brent Graveley)Preparation of nuclear extract and cytoplasmic extract ...

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝 ...

1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的长度为引物的标记的核苷酸到RNA-5`末端间的碱基数，所得cDNA的量和目的RNA的起始量成正比。理 ...