DNA制备

没有的位点：NotI SfiISpelAatI6个位点:123473148133000399954059940617片段长度:190441243678866995151960418AatII10个位点:511093991124814979290414081141118422524556845597片段长度:14062117705109428937313316290618491134 30729Ac ...

慢病毒载体构建.pdf

1. 引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种 主要都是由ABI/PE 公司生产，而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪，可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。 亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定 ...

1、目的基因的获取： （1）特定细胞表达的目的基因：提取RNA后进行反转录，PCR扩增；（2）载体中含有的目的基因：酶切或PCR获取；（3）融合蛋白基因：根据需求，进行PCR合成目的基因；2、穿梭质粒的构建：（1）携带目的基因的穿梭质粒的构建：通过酶切、连接的方式得到，一般采用的是pShuttle-cmv载体；（2）携带多个目的基因的穿梭质粒的构建：如同时表达两个目的基因，可通过IRES将两个 ...

SUPER Green Ⅰ（10000× DMSO溶液，电泳级） SUPER Green Ⅰ核酸染料特点 ● 无毒性：属花箐类染料，容易生物降解，无致癌毒性。● 灵敏度高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：无须脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。● 适用范围广：可适用于多种凝胶电 ...

AGROBACTERIUM COMPETENT CELLSYou should double up this protocol - it is almost the same amount of work and you can thus get some 80 tubes. 1. Inoculate colony O/N in 2 ml YEP + antibiotics at 28C shak ...

（1）原理慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试 ...

（1）原理腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是 ...

Day 1 (9-12am) plate 30.000 293t per well on 24 well plate in 1 ml medium/well Day 2 (4-6pm) count cells on 1 well (should have 60-80.000) transduce the cells with 6 4-fold serial dilutions in 250� to ...

24 hours before transfecting plate out cells at 1.25 x105/well in a 6 well plate (106/100 mm plate). The density should be about 25%. Too low ― the cells will die; too high ― they will label inefficie ...

Vector Production EPFL 2007.pdf

OverviewSingle-gene knockouts using λ red system adapted from Datsenko and Wanner paper. The goal of this protocol was to create an endA (endonuclease I) knockout but obviously it can be adapted to an ...

Amicon Ultra-0.5 mL Centrifugal Filters for DNA Purification and Concentration操作示意图：With their vertical membrane design Amicon Ultra 0.5 mL filters deliver great performance and lower spin timesConcen ...

shRNA 苷酸序列的设计方法设计方法 确定一段合适的21 个碱基的靶序列是有效的敲低某个基因的非常重要的第一步。现在一些互联网上的服务器能够帮助提供一些线索。例如，由Whitehead 生物医学研究所（TheWhitehead Institute for Biomedical Research）设立和维护的siRNAext 程序（http://jura.wi.mit.edu/siRNAext）， ...

慢病毒包装步骤 慢病毒包装简要步骤：以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min4、 ...

美国MicroFab公司，成立于1984年，一直致力于喷墨打印技术在工业领域的应用和发展。至今MicroFab的产品和技术已经涉及到非常广泛的生产和科研领域。每个领域都会有专业的应用工程师提供建议和解决方案，从制造业到研究机构，MicroFab都能为您提供精确微量点滴的产品和技术方案。包括有： 铅与无铅焊料的粘合剂； 光学和电子聚合物； 蛋白质及DNA等生物 ...

Abstract Lumigen HyPerBlu reagent is a one solution chemical substrate based on dioxetane chemiluminescent technology. With HyPerBlu reagent a direct reaction with hydrogen peroxide produces an intens ...

Abstract Spatial and proteomic information are retained and varying combinations of biomarkers can be investigated including nuclear-to-cytoplasmic expression of a single marker colocalization of two ...

1、pCMVp-NEO-BAN载体特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成， 在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。插入外源基因的克隆位点包括Sa ...

滤血膜使用方法说明.pdf