腺病毒RNAi干扰

（1）原理
腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是在体外），由于具有宿主范围广，对人致病性低；在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因；能有效进行增殖，滴度高；与人类基因同源；不整合到染色体中，无插入致突变性。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送miRNA/shRNA的方式是非常有效的选择。
（2）服务流程
1）构建表达miRNA/shRNA的腺病毒载体，采用PacI消化纯化质粒使ITRs裸露出来。
2）将腺病毒表达克隆转染293A细胞。收获细胞以制备病毒粗提液。
3）将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。确定病毒滴度。
4）将病毒上清加入靶细胞中
5）分析miRNA/shRNA的表达和相应的Knockdonw结果
（3）您需要提供
1）表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要Knockdown的靶基因的名称、序列；
2）所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化
3）若需要检测靶基因的表达变化，如需要请提供相应的抗体
（4）我们提供
1）提供重组后的腺病毒载体质粒，并附上PCR鉴定结果
2）提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的腺病毒储存液