DNA重组

CaPO4 Transfection for Chromaffin Cells1. 2M CaCl2 - 11.1g CaCl2 (anhydrous) + 47.3 ml H2O (or 14.7g CaCl2-2H2O) Filter sterilize and store at 4'C 2. 150 mM Na2HPO4 -2.13g Na2HPO4 + 99.7 ml H2O (or 4.02 g Na2HPO4-7H20 + 97.8 ml Store at 4'C (pH is 9, nothing will grow In it) 3. 2x PlBS 280 mM NaC1 1.84g 40 mM PIPES 1.21g 1.5 mM Na2HPO4 1.0 ml of 1 ...

Labeling oligonucleotides with 32P ATPSteve HahnLast modified 8/13/01Wear gloves throughout and work in radiation area. Monitor area before and after use.Mix the following in an eppendorf tube:1. 0.5 microgram oligonucleotide dissolved in H2O.2. 3 microliters 10x kinase buffer.3. 2 ...

AbstractGene expression and regulation are mediated by DNA sequences, in most instances, directly upstream to the coding sequences by recruiting transcription factors, regulators, and a RNA polymerase in a spatially defined fashion. Few nucleotides within a promoter make contact ...

甲基化研究对于基因的 调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《the Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程度是诊断结肠癌最灵敏的标记。研究人员发现，肿瘤的发生以及一些遗传病的出现 ...

Creating a deletion by PCR splicingContributed by Dr.A.GratchevI didn't want to place this in the methods section due to its simplicity. To delete a desired fragment from existing DNA fragment all you need is a pair of primers combined of flanking sequences and a high fidelity polymerase (a mix of Taq a ...

Whole-Genome and Custom Fine-Tiling Array CGHComparative Genomic Hybridization (CGH) measures DNA copy number differences between a reference genome and your sample genome. NimbleGen offers two high-definition array CGH products: whole-genome array CGH and fine-tiling arr ...

Nick Translation of DNA for CGH1. Prepare reaction mixtures per 50ul Add Enzymes last, gently vortex mixture, quick spin liquid to bottom of tube:LabelBiotin-dUTP Digox-dUTP FITC-dUTP Texas Red dUTP 10X Biotin dNTP5 ul 0 ul 0 ul 0 ul 10X A4 dNTP0 ul 5 ul 5 ul 5 ul dUTP0 ul 1 ul 1 ul 1 ul DNA POL-11 ul 1 ul 1 ul 1 ul DNA Pol/DNAse(additio ...

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NOTE: The protocol presented below is based on the Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) technology developed by Marc Zabeau and colleagues at Keygene N.V., Agrobusiness Park 90, P.O. Box 216, NL-6700 AE Wageningen, Netherlands (Zabeau, 1992; Zabeau and Vos, 1993; Vos et al., 1995). The AFLP ...

Adsroption of Anti-E. coli Antibodies Grow E. coli strain Y1090 in L broth at 37°C overnight. Transfer to 10 mM MgSO4 and store at 4°C for future use. These cells are good for about 1 week.Soak one 132 mm nitrocellulose membrane per Petri dish in 10mM IPTG (MW=238.31). Briefly blot the excess solution from the filt ...

1)Nuclear extract: see nucprep.ptc & nucext.ptc extracts should be at least 3ug/ul Probe preparation: see endlabl.ptc & isotach.ptc. probe shouldbe 10©20k cpm/ul. Fragments larger than 400bp should not be used. Make A stock (25ug/50ul) of probe plasmid digested at one end w/ 5' overhang. 3)Binding ...

Serial Analysis of Gene Expression (SAGE)SAGE is a powerful tool that allows the analysis of overall gene expression patterns with digital analysis. Because SAGE does not require a preexisting clone, it can be used to identify and quantitate new gene as well as know genes. cDNA/AFLP (CWB Bachem)T ...

据《科学时报》2007年1月5日报道：由西北农林科技大学博士生导师王跃进教授主持完成的国家转基因植物研究与产业化开发专项“中国葡萄属植物野生种抗白粉病基因克隆”研究项目，经过6年的探索研究，近日在陕西杨凌通过了国家教育部组织的鉴定。与会专家一致认为：该课题针对世界葡萄生产中存在的问题，综合采用现代分子生物学技术，以我国特有的高抗白粉病的中国葡萄属野生种华东葡萄白河-35-1为材料，在抗白粉病基因克隆与功能分析、 ...

抗原提纯与动物免疫 　　对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。　　选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。　　免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动 ...

PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitro ...

单拷贝克隆产量低，高拷贝克隆稳定性差，一直让研究者在克隆表达时难以选择。蛋白的表达就有诱导表达系统，可以实现人为地控制蛋白的表达时间和表达量——现在连质粒的拷贝数可以借助诱导的方法来人为控制了！Epicentre的专利技术——CopyControl克隆系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl克隆首先以单拷贝形式生长——单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆编码毒性基因序列——在需要的时候，再诱导成 ...

科技日报2006年10月9日讯 美国科学家新近用一种完全成熟的体细胞——粒细胞克隆出小鼠，这是世界上首次使用处于终极分化状态的体细胞培育出哺乳动物。 　　 这项研究由康涅狄格大学、匹兹堡大学和耶鲁大学医学院等机构的科学家共同完成，由华人科学家杨向中和程涛领导。研究证明体细胞的克隆潜力比成体干细胞更大，并为克隆羊多利身份的真实性提供了进一步依据。 人们以往认为，成体干细胞具有一定的分化潜力，用它来克隆动物比使用分化后的体细胞效 ...

最近美国科学家表示他们利用已经分化的细胞作为细胞核供体，发明了一种一步式体细胞核克隆技术。 Connecticut大学的科学家们表示，他们的研究表明利用完全分化的粒性白细胞能比利用未分化的造血干细胞更有效的得到克隆的小鼠胚胎。 体细胞核移植技术指的是将细胞核供体的核取出，然后植入去核的卵细胞中的过程，通过这一过程可以得到克隆动物。之前的报道表明，利用分化的体细胞克隆小鼠只能通过两步过程实现，第一步是用体细胞核移植 ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μL ，要切出小片断的质粒B酶切7μL；琼脂糖回收胶电泳；切胶回收来自质粒A的大片段，和来自 ...

浙大求是新闻网2006年10月12日报道：10月9日上午，浙江大学动物预防医学研究所于涟教授主持的浙江省重大科技攻关项目“新型免疫佐剂鸡白细胞介素2的克隆、表达及应用研究”，通过了省科技厅主持的成果鉴定和项目验收。 新型免疫佐剂的研制与开发是当代新疫苗研究中的一个非常重要领域。经过多年的刻苦攻关，于涟教授带领的课题组成功克隆了我国地方品种萧山鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因，并对基因结构进行了分析，这是国内在Ge ...