DNA重组

lim1896 现在基因敲除技术里好多用的都是同源重组的方法！！！但是，为什么同源就会重组呢？看了好多书还没悟出来原因，而且，基因敲除过程中会有二次重组，这又是为什么呢？？？求解！！！bigbang_0_0 二次重组是Cre-依赖的条件性基因敲出范畴George2 下面的材料对理解同源重组很有帮助，供你参考1、概念基因敲除（geneknockout），是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺 ...

keanu21797409 请问 用什么方法判断 一个病毒的基因组 是否发生重组？谢谢各位。。。freecell 1、生物信息学方法分析： 例如http://www.chinagene.cn/yc/qikan/manage/wenzhang/2005-32%281%29-7.pdf2、PCR结合测序分析： 例如http://www.virologyj.com/content/5/1/143http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/781 ...

DNA的重组T载体连接(T/A cloning)(一)、试剂:a.外源片段DNA；b.pGEM®-T easy 载体或pMD18-T 载体。(二)、流程:a.将pGEM®-T easy或pMD18-T离心至管底。b.建立以下连接体系(每次使用前切记将2×Buffer振荡混匀):表格 14、pGEM®-T easy连接体系成份10µl体系20µl体系2×Rapid Ligation buffer最好按照每次用量分装，避免多次冻融。5µl10µlpGEM®-T1µl1µl ...

文章题目：Primase-based whole genome amplification文章出处：Nucleic Acids Research 2008 36(13):e79; doi:10.1093/nar/gkn377推荐理由：该文提出了一种不用加引物就能将基因组大量复制，你相信吗？请欣赏一下这篇精美的文章吧！设计的非常巧妙！摘要：In vitro DNA amplification methods, such as polymerase chain reaction (PCR), r ...

第四节 病毒载体携带的siRNA介绍在大多数真核细胞，RNAi是一个高度保守的机制，它被认为是基因表达和抗病毒机制的调节剂。1-4 RNAi是一个多级的过程，第一步是:在一种核糖核酸酶Ⅲ样的酶(Dicer5 )的作用下，双链RNA(dsRNA)被裂解成小干扰RNA(siRNA)。6这些21到23个核苷酸的siRNA随后参与构成RNA诱导的沉默复合物(RISC)，可以将siRNA带到同源mRNA的地方，并将其破坏。在2001年，E ...

蛋白标签（protein tag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。一、 新型蛋白标签蛋白标签应用极为广泛，但仍有两个问题不容忽视：（1）蛋白标签以DNA形式编码，它需要转录并翻译成蛋白后才能发挥作用，而这种作用方式本身就是一种缺陷。例如，常用的荧光蛋白标签，在显微镜下观察时，其显 ...

肿瘤转化研究杂志TCR“DNA断裂与修复”翻译工作全面启动目前，TCR杂志“DNA断裂与修复”特刊翻译人员招募工作已顺利完成，自在丁香园发帖招募翻译人员后，深受广大战友们的欢迎，大家踊跃报名，共有近20位报名人员。经组织专家讨论，确认由南京大学医学院附属鼓楼医院顾劲扬担任本特刊的主译。一叮等10位站友担任译者（见表1），其他报名人员拟按排TCR杂志其他特刊的翻译工作，感谢大家的积极参与！现将具体任务安排公布于下。表 ...

基因工程的诞生基因工程是分子水平对生物遗传作人为干预，要认识它，我们先从生物工程谈起：生物工程又称生物技术，是一门应用现代生命科学原理和信息及化工等技术，利用活细胞或其产生的酶来对廉价原材料进行不同程度的加工，提供大量有用产品的综合性工程技术。生物工程的基础是现代生命科学、技术科学和信息科学。生物工程的主要产品是为社会提供大量优质发酵产品，例如生化药物、化工原料、能源、生物防治剂以及食品和饮料，还可以为人类提供 ...

活体电穿孔法介绍1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞 。近年来活体 ...

请按格式修改！！！！关于同裂酶的讨论同裂酶，国内外比较一致的定义，是来源于不同物种但能识别相同DNA序列的限制性内切酶，切割位点可以相同也可以不同。不过国内和国外在同裂酶的定义及其定名上，随不同的人有许多差异。国内外还有另一种定义，称同裂酶是来源于不同物种但能识别相同DNA序列且切割方式相同的酶。经网上检索，这两种定义出现的比例均较大，均具有一定的代表性。国内如宝生物、上海申能博彩等单位的资料上，将上述两种小类又 ...

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and expose to film • Purify putative plaques • Excise plasmid from the desired phage Some preparatory itemsThe library ...

Construction of homemade 'T-vectors'This method is after Marchuk, D., et al., 1991, Nucl. Acids Res. 19(5), pp 1154. You will need: 10 x Taq buffer (Promega)Taq Polymerase (Promega)Phenol/chloroform mix100mM dTTPTE bufferAbsolute ethanol70% ethanol 1) Digest plasmid to be used with a blunt-e ...

一、质粒DNA的提取及鉴定　　（一）质粒DNA的提取及鉴定　　1．收获细菌　　（1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。　　（2）将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中，用台式离心机于4℃以12000g离心5min，将剩余的培养物贮存于4℃。　　（3）吸尽培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。　　2．碱裂解法小量抽提质粒　　（1）将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ（50mmol/L葡萄糖，2 ...

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Mini-prep1. Spin down 1.5 ml of overnight culture in eppie for 1 minute on high.2. Asprirate supernatant and resuspend cell pellet in 100 µl Solution I (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10 mM EDTA).3. Add 200 µl Solution II (0.2 N NaOH, 1.0% SDS) and mix gently by inversion.4. Add 150 µl Solution III (3M KOAc, pH 4.8 ), vortex briefly to mix, a ...

Improved Alcohol Precipitation of DNAECKDescription========This method was suggested in a BRL "Focus" article several years ago (Zeugin & Hartley, 1985). It is a useful way to avoid coprecipitation of proteins and accumulation of salt in the final dried preparation.Protocol======1. Crude p ...

Quick DNA Plasmid Prep.This is a very fast mini-prep protocol which is suitable for sequence analysis and restriction digests. Although the yield is higher than Protocol D.1, there is considerable chromosomal DNA, RNA and protein contamination.SolutionsSucrose/Tris25% sucrose 25 g ...

Extrachromosomal elements, plasmids, selectable markersIncluding an origin of replication (i.e. the E. coli oriC region) into a circular DNA molecule is a mechanism to have an extrachromosomal element in the prokaryotic cell. Such an extrachromosomal element is called a plasmid, or vec ...

CsCl Prep of Plasmid DNAThis is a standard large scale prep. for plasmid DNA which gives a yield of 0.5 - 1.0 mg. I have made some minor changes to the MHB protocol.SolutionsSolution I, II, III from protocol D.1.Tris/EDTA pH 7.5 (optional)20 ml 1 M Tris 7.54 ml 0.5 M EDTA 8.0up to 2 liters with Qstore at 4 degrees for dialysisD ...