质粒

gtwyx 慢病毒包装质粒SIN18-pRLL-hEFIap-EGFP-WRPE，求图谱。gtwyx-fd@163.com希望得到各位战友的帮助！freecell Write to author for it.http://www.nature.com/mt/journal/v3/n1/abs/mt200115a.htmlgtwyx 谢谢楼上的战友。我想知道国内有没有用这种三质粒系统的~~~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

mnidr 我现在在做基因敲除，用的是red重组系统，pKD46质粒上携带有敲除所需的蛋白。pKD46质粒上有两个复制起始点Origin of Replication：repA101ts & oriR101 ；repA101ts是温度敏感型复制起始点。有几个问题请教：1.大家有用过这个pKD46的吗？oriR101是温度敏感型复制子还是条件诱导型复制子啊，我在网上查到它是温度敏感型复制起始点，我很不理解，为什么已经有一个温度敏感性 ...

Melody_Arrow 构建的目的片段与红色荧光蛋白pDsRed融合表达的真核质粒，成功转入细胞后，很郁闷，红色荧光蛋白是在我片段的胞外段，貌似阻碍了我蛋白被抗体识别，所以，想问一下，有没有结构相对DsRed简单，分子量更小的荧光质粒呢？最好是红色荧光不能把荧光蛋白放在胞内，还要做信号，放在胞内，怕会影响功能：（所以，想问问大家都知道有什么合适的质粒吗？ffyy8888 红色荧光质粒的应该是pRFP最小吧Melody_A ...

28810789 请问有使细胞表达某种蛋白下降的质粒吗？如果有这种质粒，那么它与RNA干扰（siRNA)有什么区别？谢谢！freecell shRNA就是以质粒形式，转染细胞后使某种蛋白表达下降的。其与siRNA区别见图。vitrogene shRNA能使蛋白质下调的质粒,它主要是用来建稳转细胞株,而siRNA却不可以.版主freecell留言:请不要发布隐形广告！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

zsutx2005 最近经常做转染，所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提，最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用，所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度，发现质粒浓度会下降20%-30%左右，这样如果继续按照之前测定的浓度做转染，就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出？有谁碰到过这种情况？如果一直 ...

mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的？原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒？我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。多谢freecell 1946年，莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒，1952年，由Lederburg正式命名为质粒。确切地讲，质粒是细菌内的共生遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型，例如对抗生素的抗性，产生抗生素，降解复杂有机化合物及限制酶 ...

arthur1999 :(正、反义表达载体是什么意思，我不明白，请大家赐教。不胜感激！！！freecell 正反义表达载体就是把目的基因正向或者反向插入到质粒中再转染质粒中含有正向插入目的基因的就是正义表达载体含有反向插入的就是反义表达载体arthur1999 学习，谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

水仙子2005 我想分别构建FOXO1 和 SIRT1基因启动子/luciferase报告质粒，用于研究X基因是否能够调控这两个启动子。但是不知道该扩增两个基因启动子区域的哪一段插入pGL3（promega）中。另外，promega的pGL3有pGL3-basic和pGL3-enhancer，该选择哪个？水仙子2005 继续求助sxd5266 pGL3-basic 没有SV40增强子pGL3-enhancer 有SV40增强子研究启动子 ...

xiongran 急求ISRE报告基因质粒，干扰素信号通路的报告基因，愿拿其它质粒作为交换！shuyangsy1986 大哥，现在你弄到ISRE的报告基因的质粒没有啊，还有β-干扰素的啊，我也需要啊，先谢了啊xiongran 几百年前的事情了，没有求到，我都不做这个了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid?zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lwjssry 【求助】积分换质粒，急求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1，积分交换，详见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=11398213&sty=1&tpg=1&age=0kaige88 支持把，获得pIRES2-EGFP可要通知我哦！也想用到此质粒，呵呵。。。lwjssry 继续求助pBudCE4.1，还请大家多多帮忙啊，谢谢！kaige ...

质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核外能够进行自主复制的遗传单位，是细胞内的一种环状的小分子DNA，作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外。质粒是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。高质量的质粒提取是下游试验顺利进行的可靠保证。质粒制备的方法主要包括以下三个步骤： 细菌的培养及扩增； 细菌的收获和裂解：一般常用碱裂解法。 质粒提取纯化。做过分子生物学实验的,大多数做抽提过质粒，但不是所有人都知道质粒制 ...

别人的经验，还不错，大家分享一下吧！载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。b 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段d P/E 启动子/增强子e Terms 终止信号f 加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、 ...

如何阅读质粒图谱最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于大家分享。载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。＃ ...

打算先尝试大家都赞的原核表达系统（操作简单才是上策，反正偶不打算把残存的青春继续贡献在充满毒物的环境中了），以及目前广泛应用的大名鼎鼎的Novogen公司的pET系列。经历了一次低级错误后，在实验时最可以信赖的范博士的帮助下，终于将引物定稿。感谢英骏公司总部在进行机器调试，才让我有机会改正两天前的错误，虽然不是我毕业用的实验。入正题。设计表达载体用的引物与克隆基因用的引物是两种完全不同的思路，后者需要考虑很多 ...

自己的实验刚刚开始，又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书（D6922-01和D6942-01）。希望能给和我一样的新手一点帮助，同时请大家指正多给建议，特别是自己的心得啊。全是自己打的，帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 ...

最近做大抽，用的是Qiagen Maxi kit, 一开始抽提产量少，因为是公认的昂贵而好用的试剂盒，觉得是自己操作的不好。就仔细研究了说明书，及整个提取过程，得出一些经验。（high copy plasmid）1.摇菌：菌摇得好不好十分重要。整个过程，其他步骤完全按试剂盒说明操作，一般没有问题，唯独摇菌得自己操作。a.个人觉得还是先活化摇菌8h，在稀释后扩大培养较好，不要偷懒。b.摇菌量问题：试剂盒有推荐cultrue volume，我的推荐 ...

慢病毒——基因转移的潜在新载体　　用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容 ...

我索要质粒前也是参考了很多丁香园的帖子，所以有些语句可能和以往的范本雷同，请大家见谅哦2007年3月20日主题：explore the possibility of getting *** from your laboratory信件：Dear Dr. **,I am a post graduate student in ***Institute, Chinese Academy of Sciences. And one of my projects focuses on ***. It seemed that the mechanism you ind ...

好久没有来发帖了。今日偶然看到一个小tips。帖出来和菜鸟分享。1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基） ...