抗体的纯化

染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）是研究细胞内 DNA 与蛋白质相互作用的经典技术，特别是经常用于研究某些转录因子与特定基因组区域（如启动子或其它 DNA 结合位点）的结合，或者用来评价基因组特定位点的组蛋白修饰水平。CST 推出的 SimpleChIP® 酶解法试剂盒有 9002，9003，9004 和 9005均含有标准 ChIP 流程所需的整套试剂、阳性对照组蛋白 H3 抗体、阴性对照 IgG、人和鼠 RPL30 阳性引物引物和 ...

编首语：这篇文章详细分析了 ChIP 操作的关键步骤和操作细节，让您的染色质免疫沉淀（ChIP）实验变轻松。小板凳备好、小零食备好、阿猫阿狗管好……对面有一大波干货袭来，请摆好姿势准备迎接！华丽丽的分割线……一、ChIP 实验的基本原理和主要应用？真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinim ...

制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础，抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败，不同的免疫学实验方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）对抗体的效价，浓度和纯度有不同的要求。我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。下面 ...

现在市面上抗体的厂家繁多，竞争激烈，如何能在众多厂家中挑选质量上乘，价格到位的抗体呢？影响抗体的质量有如下几个方面： 一、抗原的设计 抗原的设计是影响抗体质量的首要因素，抗原的质量好坏直接影响到抗体的应用结果，如抗体的特异性等。 二、家兔的免疫和饲养 三、抗体的纯化 如何从家兔的血清中提取纯度高的抗体呢？严格地讲要通过以下三个步骤： 1. 用Protein A-Sepharo ...

一、材料和试剂 1. PVDF或硝酸纤维素膜（Amersham，GEhealthcare） 2. 透析袋（PierceCat#68035） 3. 丽春红S（Sigma，Cat#P7170） 4. 脱脂奶粉（Carnation，any your favorite brand in local store） 5. 吐温-20（Sig ...

1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于滤纸上干燥。3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。4． 移去Buffer A，用新鲜的Buffer A 洗一次，将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血清中，1-2 h ...

IgM的纯化 大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水，故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。 颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法 又称分子筛层析或凝胶过滤，是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体，可用于样品中IgG和IgM的分离，常用于对硫酸铵粗提物的 ...

McAb的制备方法 1、体外培养 在细胞培养过程中杂交瘤细胞能产生和分泌McAb，但是一般产生的抗体量很少，约10～100μg/ml。近年来发展了各种新型培养技术和装置，包括用无血清培养液作悬浮培养法，中空纤维培养系统，全自动气升式或深层培养罐以及微囊或粒珠培养系统等。为了大批量生产McAb，有的公司已建成体内外结合的牛淋巴液循环法，大大提高了抗体的生产量。 2、体内诱生 ...

抗体-蛋白A或-蛋白G微珠层析柱的制备 蛋白A或蛋白G微珠-抗体层析柱是免疫亲和层析技术中最常用的微珠基质之一。此类层析柱容易制备，由于抗体分子是通过Fc段与微珠基质结合，抗原结合片段（Fab）可与抗原最大限度地发生作用。以下介绍的方法可用于蛋白质抗原的纯化，但类似的方案也适用于任何其他抗原。 抗体可直接与蛋白A或蛋白G结合。根据抗体与蛋白A或蛋白G的亲和力，可以选用蛋白A或蛋白G微 ...

戊二醛二步交联法制备酶标抗体 戊二醛（glutaraldehyde，GA）：是一种常用的同型双功能交联剂，它的两个醛基可分别与HRP和抗体蛋白的氨基形成Schiff碱（-N=C-），将他们以五碳桥连接起来。戊二醛连接反应是最温和的交联反应之一。可在4-40℃范围，pH6.0-8.0的缓冲液中进行。另外，GA缩合体使被结合的蛋白分子与分子之间的间隔延长，可免于使蛋白分子的三级结构发生改变。 ...

四乙基罗丹明标记抗体：1.称取1g RB200及2g PCL5放在乳钵中于通风橱中研磨5min；2.加入10ml无水丙酮，3.不4.断搅拌，5.5min后过滤，6.用滤液进行标7.记抗体。剩 余部分吸附在滤纸上，于4℃干燥保存；8.量取一定量的浓度为20mg/ml的抗体，9.按1：1：1的比 ...

筛选解离速率优化的scFv：选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。

单克隆抗体有交叉反应是由于不同的抗原上有完全相同的表位（100%的交叉反应）,或有相似的表位（不同程度的交叉反应）。

一、Required Materials and Equipment 1、Protein A or G agarose gel column (10 ml or 5 ml of packed beads; see guidelines below for choice of protein A or protein G) 2、Ice-cold Tris-buffered saline (TBS) ...

一、Materials 1、Antibody 7E3 2L sup grown in flasks frozen and thawed overnight. 2、BioRad Affi-Gel Protein A MAPS II Buffers cat. #1530-6160 ($161.00) 3、50 mM Tris pH7.8 4、40 g ammonium sulfate for e ...

1、use 2 mg of antibody per ml wet beads (use appropriate antibody/protein A or G combination) 2、mix antibodies with beads and bind at room temperature for at least 1 hr (on roller) 3、wash the beads tw ...

This protocol includes an ammonium sulfate cut affigel blue chromatography and affinity chromatography. 一、Solutions 1、Affigel Blue Prewash 0.1 M acetic acid 5.7 ml glacial acetic acid 1.4 M NaCl 81 g ...

一、Reagent and Materials 1、Hi-Trap Protein G Column (Pharmacia Biotech #17-0404-01) 2、20 mM Sodium Phosphate Buffer pH 7.0 1.084 g NaH2PO4 anhydrous 3.273 g Na2HPO4.7H2O q.s. to 1 liter with di-H2O ...

一、Conjugation of carrier (BSA) to peptide 1、Dissolve pure BSA 20mg/ml in 10mM phosphate pH 7.0. 2、Dissolve MBS-SMCC 25mg/ml in NNdimethylformamide. 3、Mix 20ml SMCC and 200ml BSA (500mg:4000mg or 1:8) ...

一、Reagents 1、Affi-gel Protein-A Agarose (BioRad #153-6153) 2、MAPS II Binding Buffer (BioRad # 153-6161) 3、0.314 g/ml diH2O 4、MAPS II Elution Buffer (BioRad #153-6162) 5、0.023 g/ml diH2O 6、MAPS II Re ...