抗原设计

胶体金颗粒呈桔红色到紫红色，有利于肉眼观察，将其应用于光学显微镜下检查细胞表面抗原．具有操作步骤少，染色深浅易控制，制片稳定，呈色鲜明，结果保存时间长，试剂无毒害以及能够用于暗视野显微镜等优点．但是直接应用肢体金标记应用于光镜研究受到了灵敏度的限制，因而很少被使用．为了提高灵敏度可以用银离子增强的方法，称为免疫金银染色法(IGSS)．IGSS方法的核心就是在免疫金标记基础上增加了一个染色标记物放大 ...

免疫金电镜技术现已在免疫化学和组织化学研究中得到了广泛应用、其所以能成为电镜下较为理想的免疫标记物主要有如下优势：（1）胶体金颗粒在电镜下具有很高的电子密度，大小颗粒清晰可辨，且不影响对原有超微结构的观察．(2)通过计量被检部分金颗粒，可以对被检抗原或抗体进行免疫定量研究.(3)采用不同直径的金标抗体进行免疫双重或多重标记染色，能在一张电镜图片上同时显示两种或多种被检测物质的组织或细胞的超微结构． ...

用流式细胞计分选特定的染色体，基本过程与细胞分选相似。不同的是，要用带有荧光标记的DNA探针同特异染色体结合，使待分选的染色体带上标记。在染色体分选中，使用的探针是同所感兴趣染色体互补的寡聚核苷酸，这种探针也可同荧光染料偶联。将结合有荧光染料的探针同染色体一起温育，使探针同特异染色体杂交，形成稳定的杂交体，这样染色体就被带上了荧光标记，稀释后送入流式细胞计的流室，然后与细胞分选过程一样将特异的染色 ...

将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同， 分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术。如免疫铁蛋白技术是将含铁蛋白通过一种低分子量的双功能试剂与抗体结合，成为一种双分子复合物，它既保留抗体的免疫活性，又具有电镜下可见的高电子密度铁离子核心，因此用铁蛋白标记的抗体可通过电镜免疫化学的方法在电镜下定位细胞中的抗原。由于某些固定技术(如锇酸固定)对抗体抗原的结合有干 ...

将显微镜技术与分光光度计结合起来的技术。它以物质分子的光吸收、荧光发射和光反射特性作为测定基础， 可用来分析生物样品细微结构中的化学成分，同时进行定位、定性和定量。

利用显微分光光度计对细胞内原有能发光的物质或对细胞内各种化学成分用不同的荧光经荧光探针标记后进行定位、定性和定量地测定，称为显微荧光光度术， 也称细胞荧光光度术(cytofluorometry)。它是一种微观而灵敏的方法，对于研究细胞的结构、功能及其变化具有重要意义。

匀浆缓冲液的问题: 蛋白质的匀浆缓冲液的一般配方都是大同小异，里面有那么多试剂，我对其中一些试剂的功能做了查寻： PMSF：蛋白酶抑制剂EDTA：金属离子螯合剂DTT：保证蛋白SH基团不被氧化矾酸钠：酪氨酸磷酸酶抑制剂 所以匀浆缓冲液的蛋白酶抑制剂保护剂对于保护蛋白质量是非常重要的。 蛋白匀浆以后是否还会降解？一般认为蛋白质匀浆以后，由于蛋白质变性，所以不会容易降解。而且不会受反复冻融的影响。但 ...

1、染色过强 原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜 孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃ DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色 原因解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5 组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延 ...

二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性 ...

将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。

在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞（Feeder cell）。在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一过程中必须使用饲养细胞。许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞，如正常的脾细胞、胸腺细胞、腹腔渗出细胞等，常选用腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔 ...

1、灰度　　灰度（grey level）指图像各种分颜色的深浅程度。比较高级的图像分析仪可将灰度分成为256级，也有的只能将灰度分成64级，总之都是2n24是26256是28。免疫细胞化学标本上反应产物的染色深浅即可用灰度来表示。能将一张标本上不同染色深度区分为几十或更多的等级，这是人眼所不及的。因此，某些实验的结果，如果用光学显微镜作一般的观察，似乎实验组与对照组无明显差异，而用图像灰度法经统计 ...

融合的方法很多，常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1最为常用。1．试剂与材料(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。(2) 1640培养液100ml。(3) 完全1640液100ml。(4) 2.5％FCS－1640液50ml。(5) HAT培养液100ml。(6) 50％PEG：取分子量4 000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g ...

1．材料(1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。(2) 1640培养液(3) 2.5％FCS－1640营养液2．操作方法(1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。(2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。(4) 用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬 ...

有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。 　　（1）免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。 　　（2）抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。 　　（3）制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并加以改进。 　　（4）所用 ...

　　若想得到理想的ICC染色结果、正确地判断抗原物质在组织细胞内的位置，除需有良好酶和抗体外，保持组织细胞内抗原物质的不动性（Immobility）和免疫活性也是至关重要的。换言之，如果抗原物质在组织细胞间弥散、丢失或失去免疫活性，无论如何努力染色都是徒劳的，所以说固定是ICC染色中非常重要的一环。ICC与其它组织学技术不同，除要求保存良好的结构外，还需保存组织抗原的免疫活性。一般认为，新鲜组织能 ...

同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。 　　(一)　原理　　氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I２氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结 ...

放射性元素半衰期射线种类及能量（百万电子伏特）βγ　　14C5720年0.155－　　3H12.5年0.0189－125I60天－0．035　　131I8.05天0.608，0.335，0.2500.364，0.637，0.722 ...

以炭疽环状沉淀反应为例，此反应又称Ascoli氏反应。（一）材料与试剂1．已知炭疽沉淀血清，购买自生物制品所。2．待测炭疽沉淀抗原3．试管5mm×50mm、滴管4．0.3%石炭酸生理盐水（二）操作方法1．待测抗原的提取（1）取可疑为炭疽而死的病畜的实质脏器1g，放入试管或小三角烧瓶中，加生理盐水5ml～10ml，煮沸30min～40min，冷却后用滤纸过滤得清澈的液体，即为待测抗原。（2）如病料是 ...

(一)　原理 　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynateFITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200 RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行 ...