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        碘同位素标记单克隆抗体

        互联网

        2125

        同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨 977 Yalow 等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。 McAb 标记同位素后除应用于放射免疫测定外,还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

         

           ( )  原理

         

          氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将 I 2氧化为 I +并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的 McAb 仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。

         

           ( )  方法

         

              在细胞冻存管内加入纯化的 McAb100 μ g 100 μ l
              再加入 10 μ l 0.05M 磷酸缓冲液
              再加入 10 μ l( 1mCi)125 I

         

                  ↓

         

             加入 10 μ l 氯胺 -T(5mg ml 溶于 0.05M 磷酸盐缓冲液 ) ,孵育时间不超过 30

         

                     ↓

         

              加入 100 μ l 偏重亚硫酸钠 (1.2mg ml 溶于 0.05M 磷酸缓冲液 )

         

                     ↓

         

              加入 200 μ l   KI 溶液 ( 少许结晶 KI 溶于 0.05M 磷酸缓冲液+ 4 %牛血清白蛋白 )

         

                     ↓

         

              用 PD10 (Sephadex G25) 除去游离 125 I
              用 4 BSA   PBS 洗脱

         

                     ↓

         

              分部收集, 0.5ml /管

         

          每管取 5 μ l 进行γ计数,计算标记抗体的比活性和标记率

         

                   结合于 McAb 125 I 放射性强度 (cpm)
            标记率 ( ) =───────────────────
                      总放射性强度 (cpm)

         

                        结合于某一管 McAb 上的放射性强度
            比活性 ( μ Ci /μ gMcAb) =────────────────
                            某一管 McAb 总量

         

           ( )  试剂器材

         

           1.  纯化后的 McAb

         

           2.   0.05M 磷酸缓冲液,氯胺桾,偏重亚硫酸钠, KI BSA

         

           3.   125 I

         

           4.  有通风装置的超净台,γ计数仪

         

           5.   PD10 (Sephadex G25)

         

           ( )  注意事项

         

           1.  严防同位素污染,工作人员必须穿着工作衣,戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用 125 I 和标记物应妥善保管。

         

           2.  如标记细胞因子、激素等,应选用更温和的标记方法,使保持更好的生物学活性。

         

         

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