蛋白提取

这个protocol应该可以满足大部分人的需求。我孤陋寡闻，因需要检测可以溶于两种不同去污剂的蛋白，看到一篇文献里蛋白提取方法，完全被折服了。太强悍了，蛋白还可以这样提。我以前一直以为裂解液裂解后，沉淀里面没有蛋白了，现在才发现沉淀里还含有大量不溶于裂解液里去污剂的蛋白。故将这个protocol发出来供我和一样的新手学习。我以前是裂解细胞，离心，测浓度，然后直接往整管里加loading buffer，再离心取上清，看 ...

几篇文献中脂肪组织蛋白质提取方法如下,与各位感兴趣的朋友分享1）Proteomics 2004, 4, 438–441Improved resolution of the human adipose tissue proteome at alkaline and wide range pH by the addition of hydroxyethyl disulfideSamples (from ten unaffected women) were cut into small pieces and frozen at 2757C until n ...

首先我的目的就是单纯的Western,要看的是一个膜受体的表达,以前我们做的方法是:提取组织(血管),加入lysis buffer,玻璃匀浆,冰上半小时,12,000rpm离心5min,取上清,加入loading buffer, 煮沸5min,上样........ 实验室所有的人做所有的蛋白都是这个步骤.从来也没有想过选择12,000rpm是什么道理. (大概认为提取的是总蛋白),在我做的过程中,感觉Western结果很不稳定,而且每次都显示这 ...

一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Poly ...

标题:植物蛋白提取试剂植物蛋白提取试剂 P1258Plant total protein extraction kit (cat # P1258)描述：植物蛋白提取试剂适用于多种植物根，茎，叶及果实等的新鲜或冻存组织。植物组织成分复杂，含有较多酚类物质、多糖、色素、次生代谢物质等，致使植物蛋白质的分离提取变得困难和复杂。本试剂采用优化的试剂和程序，能有效提取多种植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生 ...

提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2% ...

2004-02-23 19:35 yxiangmind在资料区提到：分离细胞膜蛋白的方法：1 冰上刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液A中，于室温与液氮罐中反复冻融2次。2 5000转4度离心，驱除核及未裂解的细胞。3 取上清12000转4度离心10分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液B中。4 12000转4度离心10分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液C中提取后测蛋白浓度,SDS-PAGE电泳，分装后-20度保存备用。buff ...

粒细胞溶酶体弹性蛋白酶提取方法溶酶体的提取：粒细胞提取物（大约1.8×10E10个细胞）溶于500ml 0.2mol/L的蔗糖溶液（含有1mg/ml的heparin sulfate or 100 units/ml）.在4℃搅拌24h或16h使细胞充分裂解。由于DNA的释放所得裂解液非常粘稠，而为离心造成困难。消除方法有两种：1、室温下加入外源DNAse I；2、将混合物加热到37℃以内源DNAse除去DNA。之后将裂解物在1000g离心10m ...

蛋白质提取分离技术选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的 ...

核蛋白提取实验准备：1 4℃离心机2 根据标本数计算所需I，II，III，IV总体积，取出液体，并加入蛋白酶抑制剂，（III由加蛋白酶抑制剂I与加蛋白酶抑制剂II混合物）实验操作：1 收集细胞。10ml 对照细胞（1-undefined105/ml ）培养48h后，15ml 离心管收集，300g（1370 rpm）_5min。弃上清，加1ml undefinedPBS轻轻涡旋混匀后转移至1.5ml EP管。2 4℃，300g * 5min，弃上清。3 重悬细胞于120μl缓冲液I。4 重悬细胞于120μl缓冲液 ...

要做肌浆网上的一蛋白，用RIPA试剂来从组织里提取；按它的说明如下：1.每100mg组织加入1mlRIPA和10ulPMSF（不能预先加到RIPA种，否则PMSF失效）。样本以玻璃匀浆器匀浆，埋在冰里，间或匀浆，避免起泡沫和发热，冰里匀浆；2.将样本转移到1.5ml离心管，4度高速离心30分钟。高速20000g低温离心。3.将上清小心转移到干净无菌离心管中，－20度保存。4.抽提的样本蛋白浓度可以用Lowry 法。空白对照采 ...

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