免疫组织化学实验

取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。

按其功能不同分为： 中枢（初级）免疫器官 1. 免疫细胞发生、分化和成熟的场所 2. 清除能识别自身成分的淋巴细胞克隆；包括：胸腺和骨髓(人和哺乳动物)，法氏囊(禽类) 外周（次级）免疫器官及组织 1. B细胞成熟的场所 2. 免疫应答的发生部位；包括：淋巴结 脾脏 粘膜伴随淋巴组织等 一.中枢免疫器官 (一) 骨髓—&mdas ...

背景： 其实免疫组化在DAB染色后一般有四种情况：阳性染色效果很好、阴性染色、非特异性染色很深、阴阳脸（染色不均匀）。而阴性染色是许多初学者经常遇到的头疼问题。我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化，听说步骤不难，跟我后面做了几次之后，就自己开始做了，连续做了三次，结果均是阴性染色。很扫兴，不知是什么原因导致的。 问题及其解答：免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？ 1、抗体 ...

背景： 奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的SP三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时 ...

背景： 因实验需要，于2008年07月04日初次做肝脏组织ZO-1（一种胞膜蛋白，紧密连接蛋白）免疫荧光染色，以前我对酶免疫组化非常熟悉，在园子内也有不少置顶贴和精华帖，但免疫荧光一直还没做过（原理知道，但细节不太了解）。我先用石蜡切片做了5次，结果一直不理想（表现为未见特异性强染色）；近几日，我又切了冰冻切片，做了2次，终于基本成功了。在这个过程中，我对免疫荧光染色技术有了全新的认识，而前些天 ...

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？ （1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。 （2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡 ...

一、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 二、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根 ...

前段时间写过一个胶体金的市场情况，考虑到丁香园里做研究或者研发的战友会比较多一些，结合自己的研发经验，写一些相关的东西。 一， 做胶体金研究好出论文吗？ 相对分子生物学的微观研究，胶体金出论文的难度似乎很大，总觉得一个研究做下来，就是出线与不出线，没什么可以写。为什么？ 首先，胶体金研究偏向生物技术应用研究，而分子生物学目前阶段还是停留在理论研究。所以你可 ...

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？ （1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。 （2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的 ...

一、材料与试剂 1. 小鼠 2. 抗CD3与抗CD28抗体（Biolegend，100302，102102） 3. 白细胞介素-2（IL-2）（R&Dsystems402-ML-020） 4. 聚凝胺（Polybrene）（hexadimethrinebromide，SIGMAH9268） 5. RPMI-1640培养基 ...

1、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下： 1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20 ...

组织芯片制备的技术路线和基本制作过程： 通过组织芯片制作机细针打孔的方法，从众多的组织蜡块（称为供体蜡块，donor）中采集到数十至上百的圆柱形小组织（组织芯，tissue core），并将其整齐排列另一空白蜡块（称为受体蜡块，recipient）中，而制成组织芯片蜡块。然后对组织芯片蜡块进行切片，再将切片转移到载玻片上制成组织芯片。 1.芯片微陈列设计：在构建组织芯片之前，应该预 ...

一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。二，免疫组化技术的基本原理免 ...

SABC法：ABC代表的是亲和素－生物素－过氧化物酶复合物。利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗和生物素标记的酶。SABC（链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物）就是StreptAvidin Biotin Complex的英文缩写。这一方法集中体现了目前最先进的免疫组化所必必具备的高敏感性、特异性及操作快速、简便的所有特征。 基本原理：亲和素（Avidin）存在于鸡蛋中，分子量67000。是一种碱 ...

1. 洗衣粉液浸泡 30 分钟，冲洗，晾干。 2. 洗液 （含强酸、高锰酸钾等）浸泡 24 小时，冲洗，晾干。 3. APES（1:50 丙酮溶液） 10-20 秒（注意：不能用塑料容器及塑料切片架） 。 4. 纯丙酮 I ，约 10 秒。纯丙酮 II ，约 5 秒 5. 晾干或烤箱内烤干，备用。 ...

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。 2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。 3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。 4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。 5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔) 6. 3% H2O2灭活内源性过氧化物 ...

1. 取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 3. 打孔液浸泡 5 分钟。 4. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。 5. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃ ...

一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。 二甲苯 、II各 10 分钟。 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70%2 分钟。 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O 2，室温 10 分钟（避光） ...

Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1mi ...

果蝇神经肌肉接头（NMJ）是一种研究突触发育和可塑性的模型系统。免疫组织化学技术可以用来清晰成像NMJ组成部分。在这段视频中我们将演示如何使用抗体染色法可视化果蝇幼虫NMJ。