幼稚T淋巴细胞的小鼠干细胞病毒(MSCV)感染实验方法
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一、材料与试剂
1. 小鼠
2. 抗CD3与抗CD28抗体（Biolegend，100302，102102）
3. 白细胞介素-2（IL-2）（R&Dsystems402-ML-020）
4. 聚凝胺（Polybrene）（hexadimethrinebromide，SIGMAH9268）
5. RPMI-1640培养基（GIBCO，11875-093）
6. FBS（GEMBIO900-108）
7. 青霉素/链霉素溶液（GIBCO15140-122）
8. 2-巯基乙醇（Invitrogen21985-023）
9. PBS溶液（1XPhosphateBufferedSaline，GIBCO10010-023）
10. 小鼠干细胞病毒MSCV（Clontech634401）
二、设备
1. 24孔板
2. 离心机
3. 水浴
三、实验步骤
1. 用抗CD3与抗CD28抗体包被24孔板过夜。
向24孔板每孔加入400 μl PBS含有1 μg/ml 抗CD3抗体和0.5 μg/ml 抗CD28抗体。在盖子或封口上封上封口膜，保持在4℃黑暗过夜。第二天，吸除去抗体，每孔加入400 μl RPMI-1640培养基，不要让板干燥。
2. 杀死小鼠并将CD4+CD44loCD62Lhi幼稚T细胞分类。
3. 24孔板PRMI-1640培养基中每孔播撒5×106细胞，培养细胞过夜。
4. 按1：2比例分配细胞（把一个孔的细胞分成两孔），加入IL-2至终浓度50 U/ml，培养6 h（37°C，5%CO2）。
5. 1 200RPM旋转板5 min（室温），吸除培养基，并加入1 ml 含有适量MSCV颗粒的RPMI-1640（病毒浓度取决于多于106 cfu/ml 的titter）以及5-10 μg/ml3。 聚凝胺。2 500RPM旋转板90 min（37°C）。
6. 除去上清液，加入RPMI-1640培养基供分化或增殖。
