免疫荧光染色技术

Discovery推出：认识细菌。介绍地球最古老的独立生存生物-细菌。细菌有好有坏，且亦好亦坏，在波湾战争期间，海珊利用肉毒杆菌制造出威力惊人的生物武器，然而经过多年的研究，由于适量的毒菌能痲痹肌肉，故被使用于治疗痉挛性斜颈与整形除皱上。自古以来，病菌危害人类已久，包括著名的鼠疫、肺结核等，皆让当时的医师束手无策，于是一些对抗细菌的药物相继研发出，如盘尼西林与抗生素，并成功地拯救无数的生命。但细菌内存的基因信息，却能传送新DNA予其它细菌，演化成为抗药性细菌，抗菌药物因而失效，于是人类与细菌又将展开一场生死决斗。

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免疫荧光显微法：溶液准备：PBS（pH7.4）：10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4,50mM NaCl,2.7mM KCl实验步骤：1 . 用盖玻片将12孔板盖上，细胞培养至50%浓度。2 . 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。……

贴壁细胞的免疫荧光染色方法

1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体（如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。 对照染色：①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清 ...

直接免疫荧光法测抗原

利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区，因为支原体DNA中A-T含量高，所以可将其染色而被检测到。

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）。 5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久。 ...

1、荧光显微镜基本操作流程 （1）关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯。 （2）根据样品荧光素选择相应荧光组件。 （3）选择滤光片。 （4）放好样品，找到合适的视野。 （5）需拍照先确认照相机已装好。 （6）使用结束关闭所有电源并做好使用记录。 （7）如需详细说明，请借阅说明书。 2、荧光显微镜使用注意事项 （1）荧光几乎都较弱，应在暗室内进行。 （2）关闭汞灯至少在开启15分钟后。 （3）尽可能缩 ...

1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？ 参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。 2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？ 参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会： （1）选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的 ...

免疫荧光细胞化学技术，它的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。应用的方法有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下，根据其形成复合物所发的荧光，来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法：这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体，染色时将该抗体直接滴在载玻片上进 ...

1、现状与展望 免疫荧光组织化学技术经过半个多世纪的不断改进和创新，已成为现代研究生物和医学的重要手段之一。由于免疫荧光技术与形态、机能相结合不断完善和发展，尤其是合成了多种新荧光素与抗体容易结合，结合物稳定。可以和FITC结合进行免疫荧光组织化学双标记或三标记。至今，它已和亲合化学技术如SPA、Biotin以及avidin、ConA相结合，应用领域也日益扩大，又与现代的电子计算机和扫描电视技术， ...

1、荧光显微镜 荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具，分透谢和落射二种类型，落射光无需镜内操作方便，效果更好。它是由超高压光源、滤板系统（包括激发和压制滤板）和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 2、荧光显微镜标本制作要求 （1）载玻片 载玻片厚度应在0.8-1.2 mm之间，太厚的玻片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在 ...

1、染色特异性和敏感性的测定方法 （1）特异性染色和效价测定 直接染色效价以倍比稀释荧光抗体溶液如1：2、1：4、1：8……，与相应抗原标本作一系列染色，荧光强度在“+++”的最大稀释度，为其染色滴度(效价)或单位。实际染色应用时，可取低一个或两个稀释度(即2~4个单位)，如染色效价为1：64，实际应用时可取1：32或1：16。间接染色效价可按抗 ...

制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一，制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光色素。目前主要常用于标记抗体的荧光色素如下： 1、异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC） FITC是一种呈黄色粉 ...

为了保证免疫荧光组织化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次试验时进行以下对照试验： 1、直接法 （1）标本自发荧光对照 标本只加PBS或缓冲甘油封片，荧光显微镜观察组织内如果有荧光，称为自发荧光。 （2）抑制试验 可分为二步方法和一步方法。 一步抑制方法：先将荧光抗体与过量未标记特异性抗 ...

免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，荧光素受激发光的照射，由低能态进入高能态，而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后，再回到原来的低能态，这时发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色)，利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织 ...

一、免疫荧光组织（细胞）化学技术的发展简史 免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器 ...