免疫荧光染色技术

免疫荧光实验步骤脱蜡至水二甲苯Ⅰ(8min)二甲苯Ⅱ(8min)无水乙醇和二甲苯1:1(5min)无水乙醇(3min)95%乙醇(3min)85%乙醇(3min)75%乙醇(3min)PBS洗3遍二．抗原修复柠檬酸钠抗原修复液修复。抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性 ...

随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。一、CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势：1、新型罗丹明核心罗丹明染料 ...

dhy481 如图，红色是TRITC标记的细胞膜上的一个蛋白，绿色是FITC连接的一段小肽，是在细胞固定前加入到培养基里的，大家帮忙看看，这是不是共定位，谢谢大家～woxingwosu 看起来好像不是共定位。如果要说共定位，或者说小肽能结合到膜上的蛋白，我认为至少在膜上的绿色至少要比其他的地方要亮的多，这样才能说明是共定位，你这个有可能是非特异性的分布而已。需要加个对照来看看吧。个人意见，呵呵～～P.S. 这个图照得太不清楚了， ...

常用的免疫酶染色方法又分为以下两种方法：-酶标抗体法直接法间接法-非标记抗体酶法酶桥法PAP法(1) 酶标抗体法通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，与标本进行反应后，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。-优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。-缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。(1) 酶标抗体法——直接法将酶直接标 ...

免疫荧光技术直接免疫荧光法测抗原基本原理　　将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。试剂与仪器l 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4l 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释l 缓冲甘油：分析纯无荧 ...

今天因为要学做免疫组化，在网上找了很久才找到一本介绍免疫组化的好书，很系统，也很全面，请大家共享!实用免疫细胞与核酸分子杂交技术http://www.37c.com.cn/literature/library/theory/102/前言第一章　总论　　第一节 有关的免疫学理论　　　　一、抗原、抗体的概念及抗原抗体的关系　　　　　　（一）抗原　　　　　　（二）抗体　　　　　　（三）抗原与抗体的关系　　　　二、抗原的性质及种类　　　　　　（一）抗原的性质　　　　　　（二）抗原的种类　　　　三、抗体的性质和种类　　　　　　（一）抗体的一般性质　　　　　　（二）抗原性和 ...

一、免疫细胞化学技术的概述•免疫细胞化学(immunocytochemistry, ICC)–是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定细胞内抗原的成分(主要是多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为～。(一) 对抗原和抗体的要求•具有特异性高和亲和力强的抗体是实验成功的首要条件。–对抗体的要求：纯度高、比活性强；•高度特异性抗体的获得，取决于抗原的纯度。–对抗原 ...

免疫荧光细胞化学染色方法一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每 ...

转自http://www.congenes.com/htm/support_1.htmELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1 ...

说明：这是我今年做免疫组化的一点体会，奉献给大家。如有不正确的地方，敬请指教。同时，这也是我应付《免疫组化》的一份作业，老师给了我85分。斑竹呀，如果觉得有点用，就请鼓励一下，加点分吧！:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC（Strept Actividin-Biotin Complex）法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性（pH=6.0-6.5） ...

如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，**捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗 ...

Staining, histochemistry and histotechnologycompiled byJ. A. Kiernan,Department of Anatomy and Cell Biology,The University of Western Ontario,London, CanadaTable of ContentsFIXATION, FREEZING ETundefined_Carbodiimides_as_fixativeundefined_Carnoy_~8amp~J_alcoholic_fixativeundefined_Perfu_...

固定是免疫组化的第一步，很多人都忽视了这一步，认为用福尔马林就行，其实学问也挺大的用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如下。　　1．醛类固定剂　　双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强，收缩性小。有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。　　（1）10%钙-福尔马林液（浓甲醛10ml，饱和碳酸钙90 ...

请规范发贴，详情参见《免疫学技术讨论版》版规栏第二条。谢谢合作。本章讨论临床免疫学实验室用于检测分析物的分析方法，这些分析物在诊断或监测有立即发生的超敏反应或免疫性疾病的病人很有用。通常把这些实验方法总称为免疫化学技术或免疫测定方法，因为它们使用了抗体，抗原，或这两者作为检测试剂。至于天然抗体，估计一个个体能合成106-108那么多，每一种抗体都有不同的结合特异性。1.2 与抗原相互作用的结合已特异性地把宿主的防御定 ...

当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是山羊/兔抗 ...

应助后请跟贴说明并将应助的帖子连接附上以便加分。GOOD LUCK!【求助】人胃癌BGC－823细胞相关抗原的表达【求助】大鼠急性脑片培养后将该脑片制成石蜡切片的具体方法 【求助】大鼠的T淋巴细胞亚群的正常值 【求助】原代神经细胞免疫化学染色 【求助】胶体金免疫组织化学 【求助】恶性黑色素瘤免疫组化过程中如何进行脱色和预防脱片 【求助】大鼠MCP-1免疫组化 【求助】作免疫组化时噬菌体的滴度 【求助】肾癌做免疫荧光染色常用的标志物 【求助】小鼠小脑 ...

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动合成仪的诞生，大大丰富了核酸探针的来源，新的核酸分子杂交类型和方法不断涌现。按其作用方式可大致分为固相杂交和液相杂 ...

今天做了小鼠股骨的免疫荧光，好几张片子上出现这个东西，不知道是啥，请大侠指点下。还有下面这些片子为什么都是这样的，好像每个通道都有颜色，哪位大侠做过类似的么？

一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器Fluorescin acti ...

常用抗体标记荧光染料的选择随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列 (Life technology, USA); DyLight系列;Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比AlexaFluor® ...