化学生物学实验技术

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达。 并不是因为这些方法无效，而是因为它们通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序；进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。

文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。

浓缩是从低浓度的溶液除去水或溶剂变为高浓度的溶液。生化产品制备工艺中往往在提取后和结晶前进行浓缩。加热和减压蒸发是最常用的方法，一些分离提纯方法也能起浓缩作用。

浓缩是从低浓度的溶液除去水或溶剂变为高浓度的溶液。生化产品制备工艺中往往在提取后和结晶前进行浓缩。加热和减压蒸发是最常用的方法，一些分离提纯方法也能起浓缩作用。

纳米技术的一个重要目标是复杂、三维纳米结构的可编程自我组装。以DNA为构造单元，合成方法已经发展到了可生成二维设计机构和某些三维结构的阶段。Douglas等人介绍了对脚手架式DNA折纸方法的一种优化，新方法能够生成有或多或少的任何所期望形式的三维目标，尺度达到10到100纳米，并且对各种不同的DNA螺旋之位置的控制也达到了令人印象深刻的程度。这种合成方法涉及排列成褶皱链及组装成蜂巢状三维结构的DNA螺旋。各种不同的DNA链通过磷酸基团连接在一起。这种方法能够生成组装速度慢的复杂目标，但它也为组装具有纳米尺度特征的定制器件提供了一个途径，如研究人员已经用这种方法构建出了形状像方螺帽、十字槽和线框二十面体的目标。

非蛋白质氮的测定

问：本人想合成一端核苷酸，我需要很大的量，但我不知到是不是公司给我合成后，拿回来我自己再扩增，还是公司直接合成我所需要的量？ 答：首先的是要明确你合成这段核苷酸的用途。如果是单链引物，用2OD也即是公司合成的量就足够了。是双链则另当别论。 ...

问：寡核苷酸合成有什么原则吗？根据MRNA上的碱基序列，合成的反义寡核苷酸是否每个碱基都要和mRNA严格对应？比如下面的例子(中华系列杂志上一篇文章发表的)：根据下面序列 5 ATG CTG CTG CGC TCG AAG CC 3其合成的寡核苷酸如下：AS-ODN 5'- GGC TTC GAG CGC AGC AGC AT-3' NS-ODN 5'- TCA GCT AGC GAG GCT G ...

问：合成小肽时活化羧基是用活化酯法好还是酰卤法好呢想？ 答：楼上的兄弟是做液相合成的吧？一般活化脂用的是DIC，DCC，类的东西哦，但是它门容易形成沉淀，让后处理不容易分离，很麻烦，一般用酰卤的方法比较好，再说你是做的小肽，肽的序列3-10个都好用的。希望你实验顺利！ ...

问：我要合成四段长约10aa的肽来做免疫动物(兔子)，获得抗体(多抗)，想问一下在多少纯度合适？多少合成量合适？不胜感激！ 答：合成越长越好，纯度越高越好，量越大越好。不过太长了不容易合成，纯度更难以掌握。容易操作应该是指肽合成量大后，使用起来更宽裕一些，不至于太紧张。类似帖子以前也有，搜索一下吧。 答：合成长约10aa的肽有点短了，建议合成15aa的肽。纯度90%以上足可以了。合成多少量，取决于 ...

问：想合成一个12肽和22肽作为检测抗原检测猪血清中的抗体。考虑到不好直接包被，欲与载体偶联。请教用什么载体合适？合成肽是否需要加特殊氨基？ 答：12肽和22肽未必很难包被到板子上，你可以先尝试一下直接包被，检测一下。我们试过很多更小得肽，6肽，能够直接包被到板子上做实验得比例还是很大的。另外多肽得包被除了跟你多肽得大小有关系以外，还和你多肽得亲水性和暴露情况有一定得联系。如果确实包被不上，建议 ...

问：我手上有一15氨基酸的合成肽，要和BSA耦联，用于制备抗体，想用戊二醛法或用EDC/DCC法，但是我这合成肽中间的9个氨基酸是抗原表位，并且有含羧基的Asp和含氨基地Lys，用戊二醛法或用EDC/DCC法和BSA耦联会不会影响抗原性？还有没有更好的方法？希望各位赐教。 答：会影响。戊二醛法或用EDC/DCC法利用的是氨基酸残基的羧和氨基，尤其是赖氨酸的氨基。你的15氨基酸的合成肽内有巯基吗？如 ...

问：我现在合成一个小肽！有谁知道哪儿能查到比较系统的资料吗？或有谁知道应看那些书啊！我不只应怎样确定量的多少，还有具体用那种方法最好！ 多长的肽？ 准备用Fmoc？设备准备的如何？ 答：书的话，可以看看这本，Fmoc固相合成介绍的非常系统：Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis ...

利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针，避免了用双链DNA探针在杂交中自我复性，提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段，在严格的杂交条件下，可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此，寡核苷酸探针的研究，对于提高核酸杂交技术 ...

问：哪位知道根据32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤啊？我做的是骨骼肌，知道需要多少含量的骨骼肌，麻烦把详细的步骤告知，谢谢。 答：AMPK是一个蛋白激酶（protein kinase）吗？合成肽就是这个激酶的底物吧？如果是这样的话，您可以参看PKC激酶的测定protocol，很多公司比如sigma都有。（请参看附件，上面有详细的介绍和计算公式）。至于操作过程，简单的说，就是在 ...

黄惟庆、陈常德85版多肽合成，中国第一本多肽合成的专著。请下载： ...

倘若要将两种模拟肽段A和B（两者的氨基酸序列已知且已制备成功）合成一种新的嵌合肽，其多肽合成策略是否应该选用“固相合成法”中的以下策略：在固相载体上进行片段组合，即把一个个纯制过的保护多肽片段按次序接到固定在载体上的一个多肽片段上，从而得到需要的多肽。 也有文献提示，只需把A和B共轭联合在一起便可以到嵌合肽C（因为嵌合肽C仅仅是A和B的单纯连接，而并不改变A和B的序列）.倘 ...

是通过适当保护的亚磷酰胺核苷的3′端磷酸基团与5′末端羟基的酯化每次产生一个碱基而合成的，5′端羟基是通过一个接头连接到固相载体上。合成是从3′到5′的方向合成，而酶促反应是以相反的方向进行的。每一轮偶联反应包括四种反应：轻度碱水解、轻度酸水解、亲核取代和 氧化还原 替换。在偶联过程每一阶段反应后，未参与反应的化学物被洗掉。 ...

问：吴教授为什么不合成表面抗原、核心抗原表位（T.B.Th1)的氨基酸全序列？而只合成这些表位的部分氨基酸序列，再将他们组合在一起？如：核心抗原上第18-27氨基酸序列我们都知道是HbcAg的CTL表位，那141-151，117-215。。。都是什么？ 答：HBV核心C基因在不同亚型间最为保守 在它编码的180多个氨基酸中，CTL表位多位于第150位氨基酸（amino acid AA）以前，其中1 ...

1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。 今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建 ...