细胞功能测定

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相关专题 1、问：我用毕式酵母表达一个27KD的蛋白，小量表达并做SDS-PAGE有一条类似三聚体的条带。用大量表达，表达上清用镍柱进行亲和层析，在FPLC上可以看到一个大峰，但跑电泳却没有发现条带，为什么呢?请赐教 参考见解：你在大量表达后有没有跑电泳检测?表达上清用镍柱亲和层析后洗脱液有没有电泳检测?你首先要做的是:1确定你的蛋白确实有 ...

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相关专题 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % e ...

相关专题 1、96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。 2、去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。 3、37℃，孵育1～4h。 4、加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。 5、在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为 ...

相关专题 以下是根据NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干细胞培养protocol整理而成。根据经验作部分修改。 1、一般培养：保持胚胎干细胞处于未分化状态 培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代 2 、体外分化 培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板(使用或不使用盖玻片) 体外分化方法 注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其 ...

相关专题 小鼠胚胎成纤维细胞的富集 1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。 2、用70%乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。 3、用剪刀剪开每一测的胚囊并将胚胎移到培养皿中。 4、用两副钟 ...

相关专题 一、原理 细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 细胞融合的 ...

相关专题 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5μm之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。 细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世 ...

相关专题 1.如何选用培养基? 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基(SFM)。 2.为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌 ...

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相关专题 生物实验中的封闭剂 经典的转膜方法是电转移，因为电转移需要配套垂直电泳槽来进行。如何做这个“海绵—几层滤纸—胶—膜—几层滤纸—海绵”的“三文治夹心”，在分子克隆上已经有详细的介绍，相信大家都很容易找到。一些细节： 记得全程手套操作，一则避免手印污染影响结果，二则保护自己(未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体， ...

相关专题 一、筛选之前确定G418浓度： 1、由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2、G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就 ...

相关专题 生物实验中的封闭剂 杂交膜上有很多非特异性的蛋白质结合位点，为防止这些位点与抗体结合引起非特异的染色和背景，一般用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点来降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和 ...

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相关专题 生物实验中的封闭剂 I、步骤： 一、固定： PBS 5min×3次 振荡洗涤制作好的细胞爬片。 固定液覆盖细胞，RT 静置15min。 PBS 5min×3次 振荡洗涤。 二、通透化： 通透液覆盖细胞，RT 静置30min。 PBS 5min×3次 振荡洗涤。 三、封闭： 封闭液覆盖标本表面37℃孵育1h。 四、一抗孵育： 一抗以合 ...

相关专题 摘要 一些人或许认为，生物安全柜不过是一个装有风机和一些HEPA过滤器的铁箱子;事实上生物安全柜要复杂的多。同样，保持生物安全柜的安全性能也远比“定期更换过滤器”复杂得多。 本文旨在为大家在安全柜安全性能原理上破疑解惑，为实验室工作人员、管理人员和其他涉及安全柜使用维护的相关人员的工作中给予指导。 1. HEPA/ULPA 过滤器 ...

相关专题 我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但 ...

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