细胞功能测定

相关专题 （一） 测原理细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。（二） 用价值流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确；（2）可用许多相关分 ...

相关专题 一、原理 人外周血小淋巴细胞，通常都处在G1期（或G0期），一般情况下不进行分裂。如在培养液中加入植物血凝素（PHA），这种小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，低渗和固定，即可得到大量的有丝分裂细胞。人体的1ml外周血内一般含有约1×106～3×106个小淋巴细胞，足够染色体标本制 ...

相关专题 ㈠、概述 整体动物心肌细胞的增殖能力在出生后仅能维持一个短时期，小鼠在出生3周后DNA合成所需的酶的活性及心肌细胞的增殖能力就明显降低至成年鼠水平。小鼠心肌细胞的原代培养，一般选用生后1-10d的乳鼠心脏，尤以出生1-4d的较好，此时心肌细胞已分化充分，适于作各种研究，而出生4d以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为 ...

相关专题 一、配制用水 培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。 二、培养基 培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至 ...

相关专题 基本原理 ： 本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用，在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同，应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞，或两者同时，或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时，可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检 ...

相关专题 一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可区分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培养中一开始就长得很好，染色体分析 ...

相关专题 一、原理 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的，因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近，或在染色体臂上呈现“团块”，这些染色质主要由C显带技术呈现，故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA，但在C带区有很强抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可 ...

相关专题 一、原理 1976年Goodpasture等应用银染色技术，使9种哺乳动物的核仁组织者区（NORs）特异性的染为黑色，该技术被称为Ag-As的银染技术，银染色阳性的NORs被称为Ag-NORs，与Hsu等人用原位分子杂交得到的结果比较，表明Ag-NORs就是18S+28S核糖体基因（rDNA）的分布区，后证实染色的不是rDN ...

相关专题 一、原理 骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者，特别是慢性或急性粒细胞性白血病，因为骨髓反映粒系统细胞增生情况，这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病，也不主张用外周血，因为加PHA刺激外周血培养，只能获得正常淋巴细胞分裂相，并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。 骨髓细胞属不断增殖的细胞，培养可分短期培养和直接制片法，无论 ...

相关专题 市场上供应的大多数培养液的配方非常接近，这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法，这个方法是保守的，在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中，观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞，不过也很容易扩展到贴壁细胞。 细胞的生长参数 1．翻倍时间（D ...

相关专题 细胞培养（Cell Culture）专题：http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cellculture.htm初代组织块培养： 取新鲜肝脏，先剥除被膜和血管等纤维成分，用刀或剪刀把肝脏剪成1mm3左右的小块，采用帖壁培养法。 初代消化法培养： 1．把肝组织切成2～4立方毫米的小块，用不 ...

相关专题 细胞培养（Cell Culture）专题：http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cellculture.htm1．取产后的新鲜脐带。如不立即培养可以保存于4℃中，但不宜超过12小时。无菌剪取长10～15厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管，亦可用于培养。 2．先用三通注射器吸温PBS液注 ...

相关专题 细胞培养（Cell Culture）专题：http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cellculture.htm一、制备1000mlRPMI 1640培养基； RPMI 1640 干粉培养基10.4g（1包） 蒸馏水 400ml 　　　↓　 磁力搅拌至完全溶解 　　　↓　 加三蒸馏水定容至1 ...

相关专题 1．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80％～90％汇合单层培养细胞。 2．加秋水仙素：使用最终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6～10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6～12小时后，再于37℃温箱继续培养6～10小时处理（加秋水仙素）。 3．采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与 ...

相关专题 细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。 1） 抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体 1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用。 2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天 ...

相关专题 1．培养液准备：取15ml培养瓶数个，每瓶内分别充入5ml培养液（pH 7.2），内含：1640培养液（含10％～15％小牛血清），PHA 0.1ml，青霉素100单位和链霉素100微克/毫升 培养液 2．抽血针管准备：取2～5ml针管一支，在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中安装好注射器，无菌抽肝素（100 U/ml BBS）少许湿 ...

相关专题 一、初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组 ...

相关专题 直接培养法：（适于培养含纤维少的软组织）1．在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。2．把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，置试管架3～5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2～3次。3．末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。不待细胞 ...

相关专题 1）染色体显带 显Q带法 1. 漂洗：取经过干热预处理或已老化的染色体标本，置于pH6.0缓冲液中浸5~10分钟。 2. 染色：浸入pH6.0的GM或QD染液中5~10分钟。 3. 漂洗：浸入新鲜pH6.0缓冲液中漂洗两次，每次5分钟。 4. 观察：向标本染色体面滴1~2滴新鲜缓冲液，覆以盖片（避免出气泡），置荧光显微镜下观察。 ...

相关专题 1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1 ...