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        细胞培养实验

        互联网

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        相关专题

        细胞培养 (Cell Culture)专题:
        http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cell culture.htm
        一、制备1000mlRPMI 1640培养基;
        RPMI 1640 干粉培养基10.4g(1包)
        蒸馏水 400ml
           ↓ 
        磁力搅拌至完全溶解
           ↓ 
        加三蒸馏水定容至1000ml
        在超净台内无菌条件下,用灭菌后的并置有0.22μm孔径滤膜的过滤器 除菌,并分装成200ml/瓶,-20℃保存备用。用前取一瓶溶解,每200ml培养液加灭活的小牛血清至终浓度为10%,即加22ml。再加青霉素和链霉素至终浓度各为100U/ml。
        小牛血清灭活方法:将-20℃冻存的小牛血清取出溶解后,置56℃水浴30分钟即可。
         
        二、操作方法
        1、准备:每次操作前用30W紫外线管灯消毒超净台20~30分钟;肥皂水洗手,0.2%新洁尔灭或70%酒精擦手。在开始操作前打开空气过滤装置,点燃酒精灯(以后一切操作均在近火焰处进行)。
        2、换液和传代:通常细胞置于自控CO2温箱培养,箱内稳定供应5% CO2 ,如营养成分已耗尽,则需更换培养液。一般情况下,当细胞生长铺满瓶壁需进行传代,其方法如下:①弃掉旧培养液,加入0.25%胰酶消化液,消化2~5分钟(每一细胞株有其指定的消化液和消化时间,必要时显微镜下观察掌握)。②吸出或到掉消化液,加适量培养液用吸管轻轻吹打使细胞悬浮。③取少许计数,将细胞悬液接种新培养瓶中传代培养。
         
        三、细胞冻存
        【用品】
        对数生长期细胞(证明无支原体污染)
        0.25%胰蛋白酶 10.0ml
        BSS 50.0ml
        培养液 20.0ml
        DMSO(优质无色;或优质无色甘油) 若干
        吸管 5支
        离心管 4支
        塑料或玻璃安瓿(2ml) 5支
        喷灯或酒精灯 1支
        标记小牌和线绳 若干
        纱布小口袋(三层) 5个

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