细胞功能测定

最近第一次养细胞就养成功了非常高兴发上来跟大家分享养细胞主要是无菌我用得是组织块消化法首先要把培养用的DMEM和PBS 用过滤法抽吸式过滤一下取材时注意无菌150克的大鼠用7毫升的1%戊巴比妥消毒用DMEM反复清洗用眼科剪刮去外膜剪开血管用棉签刮去内膜的脂滴再用眼科剪剪成碎块铺到培养瓶里均匀铺开滴少许含20%FCS的DMEM湿润一下然后再加3---5毫升的DMEM(含20%FCS)到培养瓶内使铺组 ...

1.什么是细胞转化？何时会发生细胞转化？　　细胞转化是细胞发生遗传性状改变的一种变化，它的基础是DNA或基因的突变。从属性上说，基因突变导致生物体发生的转化，有利于生物体的转化，也有不利于生物体的转化（例如癌变）。　　在体外培养的细胞，受到致突变作用时便可发生转化，凡能诱发DNA（基因）结构改变的因素均视为诱发因素，有物理因素（如射线）、化学因素（MNNG）、病毒（EBV、SV40）、癌基因也是， ...

一、原理黄色的噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。二、实验步骤（实用于贴壁细胞）1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔 ...

方案11．细胞培养材料：取病人手术切下的病理性瘢痕组织及其周围正常组织。2.取材部位：前胸、四肢等，病人年龄从3到35岁，瘢痕生长时间为6个月到1.5年。3.采取组织块贴壁法进行成纤维细胞培养。4．过程：在手术室无菌条件下将手术切下的病理性瘢痕及周围正常组织小心去除表皮及皮下脂肪组织，然后在超净工作台上用眼科剪刀将组织剪成大小约 0.5-1mm3的小块，加入少量小牛血清，接种于培养瓶中，在95%空 ...

染料同时染色细胞，为鉴别凋亡细胞和坏死细胞提供较好的方法。染料： 吖啶橙(AO)膜通透性较高的染料 溴化乙啶(EB）正常细胞： AO－ 绿色荧光强，EB－ 染色红色荧光较弱；凋亡细胞： AO－ 绿色荧光强度弱减，EB－ 染色红色荧光加强；坏死细胞： AO－ 绿色荧光强度弱或消失，EB－ 染色红色荧光强（EB可诱导AO的淬灭）。 ...

我们实验室一直用一种特简单但非常安全的细胞冻存方法，与大家共享：冻存液：一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的，质量好不用预消毒)+10％血清的完全培养基，如果细胞珍贵的话最好用10％DMSO＋90％全血清降温方法：用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹，扎紧，直接放入-70度冰箱，隔夜取出冻存管直接放液氮冻存。复苏效果对比：细胞冻存2周后复苏，本方法冻存的细胞与使用程序性降温仪冻存的细 ...

绒毛来源于胚胎的中胚层，最早的初级干绒毛出现于孕三周初，孕8周左右是绒毛发育最旺盛时期。目前国内外绒毛取材多选于8-9周。研究资料表明，绒毛取样不影响胚胎的发育及胎盘的功能。但取样的失败可导致胚胎丢失而终止妊娠。绒毛取样前者首先要检查阴道分泌物以判别阴道的洁净度，防止取样导致宫内感染。其次需做B超检查，一是确定胚胎大小，二是确定胚芽有无心血管搏动，三是确定胚芽在子宫内的位置，用以判别取材时间，是否 ...

一、细胞培养基本概念　　细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。　　在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株 ...

姐妹染色单体差别染色可使中期染色体显示深浅不同的两条单体，能借以观察姐妹染色单体互换（SCE）现象。SCE是两条染色单体在DNA合成中核苷酸序列发生互换而表现出来一种现象。即是细胞分裂是DNA同源重组的结果。SCE既是一种无害的变化（有生理波动），也可受射线、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一定成度反映细胞的损伤与修复状态。1、原理：　　在细胞培养过程中，加入一定是的5-溴脱氧尿苷（BudR ...

组织细胞用于遗传学分析最常见的是体外培养的细胞株，多为恶性肿瘤细胞株，且呈贴壁生长，仅小数细胞株为悬浮生长。培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和染色体标本制出清晰度高等优点。组织细胞染色体制备的关键是掌握好体外细胞的生长动态，只有处在对数生长期的细胞才能出现较高的分裂相，所以积水仙素处理的时机及量是染色体标本形态及分裂指数的关键。 　　1、 实验材料　　培养液（PRMI 1640、M199、DMEM ...

在恶性肿瘤的胸腹水中有大量的分裂期细胞，其中多以非整倍体细胞存在，并含有各种标记染色体。　　1、 实验材料　　2.5%碘精、75%酒精、无菌棉球、镊子20-22号无菌腰穿包、50ml离心管、秋水仙素、KCL、甲醇、冰乙酸、载玻片等。　　2、 操作过程（1）采样：选择有胸或腹水患者，在无菌条件下，轻腹穿刺或于手术取胸或腹水20-50ml；（2）培养：立即加入秋水仙素培养，最终浓度为0.02-0.04 ...

细胞化学染色是以细胞形态学为基础根据化学反应原理，将骨髓涂片按一定程序染色，然后在显微镜下观察细胞化学成分及其变化的一项检查方法。有助于了解各种血细胞的化学组成及病理生理改变，可用作血细胞类型的鉴别，以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断、疗效观察、发病机制等。细胞化学染色的方法较多，主要介绍常用的酶类、脂类、糖原等细胞化学染色。（一)过氧化物酶染色 血细胞中的过氧化物酶(PeroxidasePOX)能 ...

药物毒理体外经典实验。国家都有标准了就可以想象重要性了。自己做了一个PDF文件，方便大家收藏。中华人民共和国国家标准GB 15193．12一91体外哺乳类细胞（V79/HGPRT）基因突变试验V79/HGPRT gene mutation test-------------------------------------------------------------------------1 ...

一.常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在 ...

三.器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消： (1)新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最 ...

四.细胞培养用液的配制与消毒 器材与试剂： 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。具体步骤： (1)水的制备： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.(2)PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)： 1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2 ...

五.细胞传代培养（消化法） 具体操作： (1)传代前准备： 1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3.正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。 ...

配液：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。取鼠：鼠盆用棉铺好，取鼠。准备：事先检查显微镜、磁力搅拌器及离心机是否好用，提前三小时把小牛血清、胰酶、抗生素拿出来化开。其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。新洁尔灭（0.1％）泡纱布（用10ml5％的新洁尔灭加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开 ...

其实DMEM细胞培养基的高糖和低糖对细胞培养影响并不大，我几年前刚开始做细胞培养时也常为此困扰。如果为了保险起见，选高糖的好了。培养基中的谷氨酰胺、丙酮酸钠浓度更重要，一定注意不同货号培养基之间的细小差别，最好选组分全加 入的货号产品，毕竟省得不少另加试剂的开销。HEPES的添加也很关键，尤其对代 谢旺盛的细胞更是如此。选血清时，宁可买Hyclone公司的新生牛血清，也不要用国产胎牛血清，切记。经 ...

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。 2.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞 ...