细胞功能测定

1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。3．37℃，孵育1～4h。4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准 ...

方法一：1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5min。5．上清移至另一Ep管，加0.5ml氯仿：异戊醇抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5mi ...

1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。2．4℃ 500～1000r/min离心弃去染液。3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。4．400目的筛 ...

1．细胞收集：悬浮细胞直接收集10ml的离心管中，而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打，调亡细胞一经吹打可能脱壁，收集到10ml的离心管中，没脱壁的细胞用0.02％的EDTA消化使之脱壁，每样本细胞数为（1～5）×106，500～1000r/min离心5min弃去培养液。2．用孵育缓冲液洗1次，500～1000r/min离心5min。3．用100μl的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10～15min。4．5 ...

方法一1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。2．3ml PBS洗一次。3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。6．用1ml PI染液，4℃避光30min。7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波 ...

载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。　　质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和 ...

1. 血清必须贮存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。 3. 瓶装(500ml) ...

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1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置 取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。3. 0.5M EDTA溶液的配置称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml NaOH（1 ...

1.　标本采集　在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带， 挤出脐带血管中的血液，放入装有含青链霉素的PBS液瓶中，2h之内行脐静脉内皮细胞培养。双抗：青霉素100u/ml; 链霉素100μl/mlPBS：KCl 0.2 g/L KH2PO4 0.24 g/L NaCl 8.0g/L Na2HPO4•7H2O 1.56g/L或Na2HPO4 1.44 g/L。 在800ml蒸馏水中加入上 ...

HyperCLDB: the hypertext on cell culture availability extracted from the Cell Line Data Base of the Interlab ProjectATCC American Type Culture Collection-Cell Biology Collection is the most comprehens ...

1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 2. 细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。 3. 材料 3.1 37 oC 恒温水槽 3.2 新鲜培养基 3.3 无菌吸管/ 离心管/ 培养瓶 3.4 液氮或干冰容器 4. 步骤： 4.1 操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤 ...

1 科学研究:药物研究开发与基础研究 药物研究与开发 (1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究中药有效成分筛选与鉴定等. (2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗艾滋病疫苗等)肿瘤疫苗(多肽疫苗)等. (3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发细胞生长因子研究与开发等. (4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发人参皂甙紫杉醇等生物活性成分研究与开发. ( ...

名称机制转染效率用途优缺点影响因素磷酸钙转染法内吞作用20%细胞被转染瞬时表达1、简单有效 2、适用于贴壁、非贴壁细胞　　3、常作首选方法1、Ca2 ，DNA浓度 2、PH值，沉淀反应时间　　3、氯喹，甘油和丁酸钠处理DEAE葡聚糖转染法抑制核酸酶 内吞作用在BDC-1，CV-1和COS细胞中较高瞬时表达操作简单1、需高浓度DNa 2、DEAE葡聚糖浓度　　3、温育时间Poly-brene转染法不 ...

前段时间，经历了几个月的时间，为实验室建了一个细胞培养间。目前这个细胞培养间运转良好，培养的神经元长了10来天，长势不错，已经可以认为细胞培养室建立成功。在建立细胞培养间的过程中，碰到了许多问题，逐一解决后，觉得大家如果要建立细胞培养间，肯定也会碰到许多相同的问题，所以将我碰到的问题整理出来。首先向大家推荐一本书，个人认为是比较经典的——《动物细胞培养-基本技术指南》科学出版社，英，R.I.弗雷谢 ...

在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，这种现象称为细胞电泳（cell electrophoresis）。引起细胞电泳的电位值称为ξ电位。各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同。在恒定的电场条件下，同种细胞的电泳速度相当稳定，因而可通过测定电泳速度来推算出细胞的ξ电位。ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异，因此在诊断疾病上 ...

超净台的优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，预备时间短，开机10分钟以上即可操作，基本上可随时使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台由三相电机作鼓风动力，功率145～260W左右，将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、 ...

一、原理 扫描电镜用于观察标本的表面形态。用戊二醛和锇酸处理的染色体标本，经单宁酸(或硫卡巴肼)还原可获得较好的导电染色效果。在扫描电镜下可观察到染色体的三维结构，也可用于常规染色体核型、G带染色体核型、高分辨染色体核型的分析及染色体结构异常识别，以弥补光镜的许多不足。在扫描电镜下还可清楚地观察到肿瘤细胞癌基因扩增结构—双微体。因而此方法广泛用于细胞生物学和遗传学的许多研究。 二、染色 ...

一、原理 生物显微摄影(Microphotography)是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。在生物医学方面，主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。 二、操作步骤 (一)拍摄前准备 1．光路合轴 使光轴与光束处于同一轴线上。 2．柯勒氏照明 使观察的视野获碍均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。 ...

一、微量全血培养 (一)原理 人体外周血中淋巴细胞是成熟的免疫细胞，正常情况下处于G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin，植物血凝素)是人和其它动物淋巴细胞的有丝分裂刺激剂，它能使处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进入细胞周期开始旺盛的有丝分裂。 人体微量全血培养是一种简单的淋巴细胞培养方法。此法采血量少、操作简便，在 PHA作用下进行短期培养即可获丰富 ...