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        DNA导入哺乳动物细胞常见的方法

        互联网

        3189

        名称

         

        机制

         

        转染效率

         

        用途

         

        优缺点

         

        影响因素

         

        磷酸钙转染法

         

        内吞作用

         

        20%细胞被转染

         

        瞬时表达

         

        1、简单有效

         

        2、适用于贴壁、非贴壁细胞

         

          3、常作首选方法

         

         

        1、Ca2 ,DNA浓度

         

        2、PH值,沉淀反应时间

         

          3、氯喹,甘油和丁酸钠处理

         

         

        DEAE葡聚糖转染法

         

        抑制核酸酶

         

        内吞作用

         

        BDC-1,CV-1和COS细胞中较高

         

         

        瞬时表达

         

        操作简单

         

        1、需高浓度DNa

         

        2、DEAE葡聚糖浓度

         

          3、温育时间

         

         

        Poly-brene转染法

         

        不清楚

         

        低分子量DNA转染率高于磷酸钙法

         

         

        CHO细胞的稳定转化子

         

        能得到较多的稳定转化子

         

        1、受体细胞类型

         

        2、转染调控信号

         

          3、DNA浓度

         

         

        原生质体融合

         

        胞膜融合

         

        50-100%转染,稳定子得率为0.2-0.02%

         

        瞬时表达

         

        稳定表达

         

        1、操作复杂

         

        2、不能进行共转染

         

          3、慎用于筛选营养缺陷型变异株

         

         

        1、溶菌酶、PEG浓度

         

        2、温育时间

         

        电穿孔

         

        高压在膜上形成微孔

         

        效率较高

         

        瞬时表达

         

        稳定转化

         

        1、需精密仪器

         

        2、可用于动物、植物细胞和细菌

         

        1、电场强度

         

        2、脉冲长度

         

          3、温度,DNA浓度

         

         

          4、培养液

         

         

        脂质体

         

        脂膜融合

         

        50-60%转染

         

        瞬时表达

         

        稳定转化

         

        1、操作简单

         

        2、可用于体内试验

         

        1、脂质体质量

         

        2、DNA浓度

         

        胞核微注射法

         

        直接注射

         

        50-100%转染

         

        稳定转化

         

        1、需要特殊仪器

         

        2、处理样品数量少

         

          3、高效

         

         

        1、注射技术

         

        2、DNA浓度

         

         

         

         

         

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