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xingzhe20100228 各位实验前辈好，本人课题需要检测药物处理后wnt/beta-catenine的活性变化，用Luciferase Reporter方法，如何做？没经验，迫切需要各位高手前辈指点。是不是不用转染，直接加裂解液啊？文献都是一笔带过，晕得找不着北，不胜感激！毕业是老板不急的，怎样做你自由发挥，就这点钱，不够你自己再想办法，真希望有人管哪！毕业在即，要命呢！shylook 文献怎么可能是一笔带过呢多看文献 绝对 ...

tongenjuan 本人对试验基本不通，刚要开始做试验，涉及到siRNA干扰技术，上网查了一下，可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达，在肿瘤细胞中做，是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好？我都要准备什么？shylook 干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了细胞只能用一次一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次要做后期实验比如干扰后一周要用细胞的话shRNA表达载 ...

dxhly 我每次用PROMEGA胶回收试剂盒回收时，效率都很低是什么原因？我的目的片段为8.8kb左右，我大概加了6ug的DNA进行电泳，胶回收后最后用30ul elution Buffer 洗脱DNA时，浓度总数很低，一般在10ng/ul以内，影响后续实验，请各位高人指点，不胜感激！shylook promega的不应该这样差其实天根的就摇菌很好了割胶时尽量割小点严格按protocol操作xxzjcg 可以多加DNA上样，再割胶 ...

wj2002yx 各位大侠好：本人最近做的是关于线粒体损伤相关的研究，用线粒体抽提试剂盒，抽提的线粒体，但是在提取的线粒体的纯度，以及是否是线粒体方面，急需要一个形体上的支持，但我们学校没有电镜设备。所以想用激光共聚焦显微镜，不知道是否能看到线粒体的形态，不知道给位前辈有没做过的，能不能给一个详细的protocol。谢谢了~~~wj2002yx 没有人关注的吗？？自己先顶顶~~~天乐盼盼 帮楼主顶一顶！dongweiguang 帮楼 ...

liyouqiang666 如上图所示，请问Dgrc8,再上标fl/fl，是什么意思呢？liyouqiang666 档住看不到了，我重发一个．丝路蓝缕 表示该基因被Cre锚定，该小鼠与表达Cre酶的转基因小鼠交配后可以得到该基因敲除小鼠本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小小学药者 请问各位大侠，我看说明书上说化学合成的siRNA 用DEPC水震荡溶解 有位师姐建议说类似于引物需4度过夜 这样才能溶解完全 但这样会不会使得siRNA降解呢？ 是否可加DEPC水溶解后立即用于转染呢？baby_susan 一般操作步骤是：1，拿到在公司合成的siRNA后，一般是干粉状得，先高速离心半分钟左右，目的是使在运输过程中飞到管壁上的粉末积聚到管底。2，然后根据实验浓度和公司提供的说明书加适量的DEPC水进行溶解，， ...

泡泡龙2005 最近想做siRNA，干扰效果的检测除了RT-PCR和WB以外，用流式检测可以吗？WB怕细胞不够用的，请教各位大虾！谢谢可以ibsbio 可以的！但是必须在RT-PCR，WB有一定效果基础上！biolinkphilic 主要是看你那个蛋白的表达是不是高表达的，如果不是高表达的话，用流式更难检测出来。因为流式缺乏一个信号放大的过程。华因康基因公司 为什么不做shRNA呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

drink51 大家好，最近遇到一个很是头疼的问题。Feulgen染色法是什么东东？在网上搜了很多资料，但是解释都不是很好。今天突发奇想，到我们丁香园来求助，希望能够得到满意的答案。黄立坤 这是我在资源网站上http://goo.gl/9WJmO看到的，上传人是徐若雨，找了半天才解决你这个问题。Feulgen染色法：1924年建立，对DNA进行特异性染色基本原理：细胞中的DNA在60℃时用1mol/L HCI会解离脱氧核糖核酸，使 ...

nytimes2008 最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是网上常说的E&K公司的96白板好像都没地方买的到。有没有人做过了的。求助下。 我用的是BioTek Synergy2 多功能微孔板检测仪来检测的。nytimes2008 没人知道吗。otherwise nytimes2008 wrote:最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是 ...

joo 如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生了变构从而影响了其与C的结合，在写论文的时候这个“竞争性"抑制的词是不是准确呀？westernblotx joo wrote:如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生 ...

luking2006 我用H9C2心肌细胞系做心脏的自噬研究，想请教细胞系传代次数多30代，会对实验结果造成影响吗？看到有文献说细胞系传代多了会引起基因表达的改变。是这样吗？很急切，先谢谢大家了。我前期用传代多的细胞系做出的实验结果和大体的不一致，不知是不是这个原因。anyi63 我们用的是h9c2细胞株，细胞系是细胞株50代以后遗传突变带癌细胞特点，有可能在培养条件下无限传下去cxc11 战友：你们在哪里，我需要这个细 ...

栽梧桐等凤凰 请问细胞系表达的蛋白能否用来包被酶标板，进行单克隆抗体的筛选。就怕目的蛋白的含量不够高，做ELISA时阴性阳性做不出差异。hahadongwr 可以用来包被。你可以先对表达的蛋白进行纯化，而后测定纯化后蛋白的浓度，1-5ug/mL的浓度便可以进行后期的包被和ELISA检测。devil123 同意楼上的，一般利用杆状病毒等表达系统进行蛋白表达，产物可以用Elisa检测，如表达量低的，可以考了做westen，更敏感 ...

zhuzixiang HCT116 colon cancer cells and HCT116 p53-/- cells。请问国内哪里有这两种细胞？愿意交换或者购买。谢谢！版主woxingwosu留言:到丁香通看看？xxiaozhi 同问，谢谢！tangwt1988 我这有HCT116。可我在上海sfwsdfsdf 同问，大约要多少钱呢？juebizhidian 请问楼上现在手里有没有这两种细胞啊？ 我的实验刚好也要用到他们cpuyao juebizhidian wro ...

zhoujz 伽马-分泌酶抑制剂DAPT的中文名字及价格。望各位江湖救急。谢谢！chayeerkaishui N- ［N- ( 3， 5- difluorophen-acetyl) - L- alanyl］ - S- phenylglycinet- butyl ester)氮- - S - 苯基甘氨酸丁酯reyesa http://www.selleck.cn/products/DAPT-GSI-IX.html这个公司国内有现货。可以打折的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫 ...

yuhuashieasy 要用Compound C进行腹腔注射，sigma说Compound C在DMSO中的溶解度5mg/ml，但DMSO用于动物的浓度不能太高，按照这个溶解度的话，药液要稀释很多倍才能注射，可腹腔注射又不能太大量怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？请各位做过的或者知道的大侠帮帮忙，很急，多谢了！vetboss yuhuashieasy wrote:要用 ...

青鸟使者 小弟最近在研究VEGFR2的一个小分子抑制剂，请问高手，使用20ng/ml 的VEGF刺激HUVEC细胞前需要去血清饥饿细胞吗？如果需要，要饥饿多长时间？青鸟使者 求助啊，有人知道吗？snowwinds 我们养的是肺上皮细胞。一般是无血清培养24h后加刺激因素。lij_try 青鸟使者，你好，我一直找不到HUVEC细胞，请问您能否送我一株该细胞？我的邮箱是:lij_try@163.com 方便告诉我您的联系方式吗？十分感谢！yin ...

紫琳儿 大家好，我想请教大家一个问题：今儿上午在实验室将 100mg TPCK和 1mg的 PD98059分别溶于1ml DMSO 溶解之后，将其抽取0.5ml加入到1.5ml的无血清RPMI-1640培养液中，TPCK立马就发生化学反应生成粉红色的混浊物。而PD98059静置几分钟后也变成了黄色的混浊物。但是之前PMA也是同样的方法先溶解于DMSO，再溶解无血清RPMI-1640培养液 中。没有浑浊现象发生。问题：1、为什么？2、如果我都用D ...

magichunter 我在文献中查到，PPARr拮抗剂GW9662可以抑制药物的抗炎作用，前提是药物是通过激活PPARr来实现其抗炎作用的。即炎症细胞中的炎症因子（如：NO）升高，加入抗炎药物后，NO水平降低，当同时给予GW9662和该抗炎药物时，该药物的抗炎作用被抑制，NO水平再次升高。以上是文献的报道，但是我在实验时发现，加入了抗炎药物+GW9662后，NO的水平不但没有升高，反而降低了（与单独抗炎药物组相比），不 ...

阿兰梦 之前没有做过，只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢，但是毕竟是好几千的试剂，生怕弄错了临床医生一下子做科研，确实很多地方不懂，很艰难目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响，需要买pNF-kB-Luc 报告质粒，碧云天有；然后需要双荧光素酶报告基因检测系统，promega有；另外还需要一个内参，文献是β-半乳糖苷酶问题是：1、不知道买哪一个对：http://www.promega.com. ...

阿兰梦 看了文献测活性RhoA 有几种方法：1、经典的，是放射标记γ32-P-GTP 方法，因为放射性，现在不怎么用了。2、看到国内有文献，采用分离胞膜胞浆，然后用抗RhoA抗体做western。这是基于胞浆都是GDP-RhoA，胞膜是GTP-RhoA的原理，但是总觉得有什么不对的地方？为什么没有被广泛采用？3、现在多采用 pull down方法，RhoA-GTP与Rhotekin的RBD结合，最后用RhoA抗体检测沉淀物中RhoA-GT ...