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sophiaying 有哪位用过SB203580盐酸盐么？说是水溶，但是溶解性很差啊，我按照说明书配成10 Mg/ml，但加生理盐水50度加热了4个小时都没溶啊，期间还无数次涡流震荡，哪位能给些建议么？xiaoxiaoga 用DMSO溶解试试看，先用DMSO溶解成高浓度溶液，再用培养基或者二PBS稀释成使用液selleckchem01 SB203580一般是先用DMSO溶解作为母液储存~使用时在用反应液稀释到相应的浓度。本文 ...

stb1986 PCR产物492bp（经过测序验证），可是多次琼脂糖电泳条带却明显比500的marker要大（如图），不知原因是什么呢？GC比例为30%,可是G+C与A+C的分子量差别不大啊，请问有战友试过类似情况不？原因何在？谢谢！liupeiyanxiaohai 我也遇到过， 认为是maker不准，可以换个marker试试qst1981 我也遇到过一样的问题 我想是不是 marker的成分和咱们的loading buffer的成分不一样 ...

silencese 删选了一两个月获得的稳定转染株（带荧光）发现不发光了再删一段时间又发光这是怎么回事大家有没有碰到这样的问题有经验的能不能解答一下，谢谢了雨珠儿 你的问题问的很不清楚啊、、、、、shylook 可能丢失了吧瞬转筛稳转容易出现转移的情况silencese 稳定转染成功的细胞株是一直发光的对吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

yun126126 看了不少中药作用机制方面的论文，不少以基于-----信号通路研究---中药的作用机制研究为题目。请问各位老师，信号通路应该存在有不少条，为何选择某一个通路研究，而不选择其他的呢？是不是有什么仪器可以筛选发现药物对这个通路有作用，还是其他的原因呢？本人对这个问题不懂，请各位老师给予帮助，谢谢！fghostyun 先做一个基因芯片，通过Pathway富集分析，获取最重要的几条信号转导通路，然后通过Gene Onto ...

雨米儿 请问各位老师，我在看文献的时候都是看到先加PDTC预处理半小时或一小时，然后换成有激动剂的培养基，请问这个时候还需要继续加PDTC吗？（预实验：我的细胞加入PDTC孵育4小时左右就几乎全部死亡，所以应该加不了24H的PDTC）急盼回复~谢谢catherinechou 我现在也想了解nf-kb阻断剂PDTC的使用方法，想必大师你已经解决，还希望多多指导，如果能有PDTC阻断NF-κB路径的机制的相关文献，那将不胜 ...

forsisiteryu 各位大侠：请问 ERK 1/2 MAPK 抑制剂 PD98059对总ERK 1/2有影响还是只对磷酸化的ERK 1/2有影响了？是否有文献支持？多谢！huaina120 文献有很多，PD98059是ERK通路的抑制剂，而不是MAPK的抑制剂，对其他通路没有影响。别的通路有P38等。你可以去查文献 ，很多的蛋蛋豆豆 抑制总的ERK，不让其磷酸化selleckchem01 PD98059是ERK的抑制剂，主要是抑制靶点的磷酸化水平~ch ...

诬蝳娃娃 我在HEK293细胞中表达的蛋白能在胞质中形成聚集体，我想将细胞裂解，但是又不想让聚集体变性，RIPA buffer含有1% SDS，蛋白变性能力太强了，求能够温和裂解细胞，又不使蛋白变性的裂解液配方~非常感谢！！xhjggl 可以使用附件里的方法诬蝳娃娃 非常感谢~！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wubin6638 请问有没有操作步骤可以分享一下的MTT要求细胞数量较少而转染的时候要求细胞达到80%以上这个矛盾怎么解决呢？shylook 转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了wubin6638 shylook wrote:转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了可是是瞬时转染的啊没法传代的吧shylook wubin6638 wrote:可是是瞬时转染的啊没法传代的吧短期是可以的24h传代 8h ...

1057244563 我的重组质粒测序是对的，但是转化到另外一个大肠杆菌里涂板后长出来一片，阴阳对照都是这样，根本没有单菌落，一个划线的平板上却长出很多细小的菌落，这是什么原因啊？shylook 转化到另外一个请问另外一个 是对照哪一个讲的？一个划线的平板 是指什么lz提的问题 太模糊了不知道怎么回答你1057244563 不好意思，没说清楚。我的连接产物转化到一种大肠杆菌里，长的很好，提出质粒并PCR，测序结果是正确的。但是把提出 ...

chaleneg 对RNA正在学习中，有点搞不明白microRNA和siRNA了，两个有多少不同点呢？请高手指教啦！lwx920 推荐你去看一下，这个帖子，里面楼主归纳了很多关于miRNA知识！http://news.dxy.cn/bbs/thread/10069790?keywords=非编码RNA的研究现状PPT#10069790liubingood 我查了点资料，共同学习：小的干涉RNA（small interfering RNA; s ...

syzh1030 如题，看到一篇文章，讲Cux1蛋白的。其中讲到Cux家族成员有p200、p110、p75、p90，等，p200有三个cut重复域（CR）一个同源结构域（HD）,想请问下这个p多少到底怎么理解谢谢~woxingwosu 那是命名一个新蛋白的时候，就干脆用p代表protein，以及蛋白的分子量大小来命名，形象直观。liangjian9007 是，同意上面楼主说的mannitolzju 同二楼本文由丁香园论坛提供，想了解 ...

wolfdance 我同事从植物提取物中获得了一个小分子化合物，已经证实这个化合物可以跟A受体结合从而引起相应的效应。我同事现在想知道该化合物在A受体的结合位点。估计要用到点突变技术，请问哪个实验室或者公司有类似的外包业务。价格大概多少。除此之外还可以采用什么方法。请各位专家不吝赐教！谢谢！laforet 自己买引物和Pfu酶就可以做点突变了，很简单的，只需要最基本的分子克隆知识。wolfdance laforet wrot ...

ww_e00 我要研究Akt、PTEN蛋白在接受处理因素后的变化情况。参考一些帖子和文章，看到：5min-120min用于研究受体传递放大信号；2h-48h用于研究细胞接受信号后出现细胞周期变化、出现特定生物行为等。于是我设计了几个时间点：15min, 30min, 60min, 2h, 4h, 8h, 16h, 应该足够研究细胞接受处理后出现的短期长期变化情况了吧？fungicider 既然你查文献中是到48小时，为什么你设计的最长是到16小时？ww_ ...

drmine 假设某基因的DNA序列是：5'-GAACT-3'3'-CTTGA-5'问题一： 对 该DNA进行体外转录，得到的RNA序列是什么？问题二： 该序列对应的mRNA序列是什么？假设mRNA序列是5'-GUUCU,问题一：由该mRNA反转录得到的cDNA序列是什么？问题二： 针对该mRNA的siRNA序列，sense strand是什么？谢谢。lifz2001 1.到的RNA是5'-AGUUC3'基因组DNA在转录后经过剪切和拼接得到mRNA。 ...

bjx2325 请教，有什么比较好的办法对甲基化含量进行测定么，谢谢！shylook 1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲基化片段bjx2325 shylook wrote:1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲 ...

zxsys123456 想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？bigbang_0_0 突变成带负电荷的氨基酸，比如谷氨酸或天冬氨酸豆龟 zxsys123456 wrote:想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？请问楼主，找到相关文献了吗？酪氨酸的磷酸化怎么模拟？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为 ...

tutufei miRNA如何构建到慢病毒载体？与基因构建到质粒载体有何区别吗？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！大鹏鸟 本质上没啥区别的。步骤：1、设计好premiRNA----带有相应酶切位点2、化学合成3、退火形成双链4、连接到相应载体5、转化感受态，6、酶切或者PCR鉴定,测序7、扩增阳性质粒，包装慢病毒，进行细胞学实验。其实不建议自己构建miRNA慢病毒质粒，现在都已经商品化了，直接买来就可以用，既节约时间，又 ...

若水无涯 请问有谁做过3’末端切平啊？我要做平末端连接，先将目的片段通过限制酶进行酶切，可两端产生的都是3'突出末端，不知道该用那种酶进行切平比较好，看见有好多都是补平的体系，现不知道具体用哪个公司的那种酶效果会比较好，是个新手，谢谢了！sgc7901 neb不错，值得推荐。NEB 若水无涯 您好！您如果要做3‘端的切除，NEB有以下几种酶建议您可以考虑： DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment and T4 DNA Poly ...

zhichunelan 邮件的内容如下： Please try S.Choi. I think that the PI moved to a university, although I am not 100% sure. I did EM work for them and Dr. Choi is the contact person. 请问其中PI是什么意思，课题组吗？EM work又是什么意思，是说的一部分工作吗？我以前是临床专业，现在刚刚开始涉猎分子细胞生物学方面的研究，各方面都有很多欠缺，希望大家多多帮忙。也希望有类似关于邮件翻译问题的 ...

zhangtt0530 各位，我做此连接两个月了，始终连不上，此图为连接产物跑电泳，第2道为pet32a载体单切自连，肉眼看出现两条带；第4道为载体与片段连接，在载体位置有一条带，下面还出现n条带，6道为载体单切回收，7道为载体双切回收，8道为片段双切回收。载体与片段摩尔比应该能保证在1:6-1:10之间，10μl连接体系，总DNA含量在60ng左右，用的NEB连接酶，双酶切用的takara酶，酶切回收用水洗脱，4℃连接2 ...