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zxlbaby 干扰一个基因表达后，EGFR的表达及tyr1173磷酸化都降低，如何分析？能说此基因具有调节EGFR的表达和磷酸化作用吗？还是磷酸化减少是因为表达减少？郁闷中。求助。amygdala 用WB检测以后最好用条带扫描软件做一个量化统计分析，看看总EGFR和Tyr1173降低的比例是否一致，这样就可以知道是哪种情况了。lilili1979 同意楼上的,可以考虑用磷酸化的/总蛋白的值, 通过此值的比较来分析磷酸化的减 ...

fanaipinger 我想用LPS刺激THP-1细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活 ,这个试验费事吗？大概需花费多钱，我是学临床的，问这个问题可能比较弱智，请予回答，不胜感激！seagate 我个人认为实验的难点在于如何把NF-kB-luc报告基因转染入悬浮细胞。niu_ren 本人正在做方面的实验,可以共同学习.共转THP-1,293T细胞.fanaipinger 那咱们可以共同交流了，很高兴遇到你。我的QQ号是86 ...

aaaa2576477 奥运会,使国外邮寄的质粒始终到不了的,很烦人的,不知道有谁知道哪里有的买的.急用!谢谢.其实表达克隆也不太懂的.最好有装好目基因的表达克隆:).fghostyun 复能基因有卖的，广州的。我以前买过，不过买回来最好测序一下验证为好aaaa2576477 谢谢!我看到了.很方便的..太感谢拉..本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：s ...

helsman 我阅读文献中发现在检测某个受体的信号通路是否激活时，用的配体浓度是例如100ng/ml,而在检测具体的功能时却用不同的配体浓度例如200ng/ml,请高手指点，谢谢！amygdala 提高浓度无非是因为200ng/ml时具体的功能更加明显，而100ng/ml的浓度对于激活相关通路已足够，但具体的功能尚不明显。一般不提倡随意改变浓度。helsman 非常感谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿 ...

snowxyh 刚刚做了PC12细胞瞬时转染NF-kB-decoy的DNA，之后加药刺激，然后想要做间接免疫荧光检测其表达，因为转染之后的细胞已经铺满达100%，不是自然伸展的状态了，是不是要把细胞消化下来，重新铺到盖玻片上啊，这时候需要贴壁24h还是要48h呢，因为PC12细胞在贴壁24h后，还不能完全达到自然伸展的状态，而瞬时转染这时候已经过了3-4天了，会不会已经看不出瞬时转染的效果了？哪位师兄师姐做过类似的实 ...

gcc19800119 因为一直没有筛选到突变IkBa质粒的稳定转染株，决定用NFkB抑制剂抑制通路后继续做实验。 因为要做体内和体外实验，目前用PDTC，但是有专家提出，PDTC不是特异性的NFkB抑制剂，研究结果可能有偏差，不能很好的说明问题，现在有点犹豫了。看了专家建议的MECRK产品，关于NFKB的抑制剂也有很多种，有很多也是化学试剂，总觉得也不是特异性的抑制。但是有两种，一种SN50和IKK的多肽片段作为NF ...

xungufeng820 各位大侠：小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好shiying0517 自己配置 ...

99shaoshuai 请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca2+,Mg2+离子？如果含Ca2+,Mg2+离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！sdyutg 悬浮细胞时，悬浮液中应不含Ca2+和Mg2+，否则会影响到细胞内钙离子浓度的测定99shaoshuai 谢谢谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的 ...

li2005wh 用蛋白激酶C-alpha抑制剂或蛋白激酶C-epsilon抑制剂来灌流组织块可行吗？蛋白激酶C-alpha抑制剂或蛋白激酶C-epsilon抑制剂能透过细胞膜吗？文竹竹 应该查阅相关试剂的说明书看看能否通过细胞膜wzc2004 li2005wh 您好！我也做信号转导，我有几种蛋白酶抑制剂和活化剂，可以和您交换您的蛋白激酶C-alpha抑制剂和蛋白激酶C-epsilon抑制剂吗？也可以买您的，我需要很少，只做几 ...

lqing2008 我在养角质形成细胞中，从皮肤上分下来细胞后，计数后，看来挺多的，可养一段时间后，为什么在测指标时细胞数量总是不够？中间有的细胞为什么贴壁不好？请问在养人角质形成细胞的各位园友，为什么角质形成细胞总是长不好，看来好像就是不长，一直就是那样子，是不是细胞密度太小了。如果要是测胞内钙离子，细胞膜上的ATP酶活性及膜流动性，可否直接从皮肤上分离下来细胞后，直接给药测指标。不要让细胞贴壁，这样测有无影响？有没 ...

dongminlyl 请教各位高手：CdSe/ZnS quantum dots (QDs)中的CdSe/ZnS 起什么作用？“The amount of Cd element inside the labeled cells was immediately measured by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP）”以及后面的“To avoid the variation from efficiency of deliverers, different treating ...

autumner 有谁用过中杉分装的santa cruz 公司兔来源的多抗 NF-kB P65 抗体？效果如何啊？我想用来做细胞的免疫荧光或是Western Blotting。望用过的战友们给个中肯的评价，谢谢！erik 我用过分装的磷酸化的p65,做western blot ,感觉不错!lsj096 请问你用的怎么样啊？我也想买个！谢谢！zhangql930611 我也用过，感觉还可以的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

经历是财富 各位站友：请问，例如caspase-3酶原分子大小是32kDa，被激活裂解为17kDa和12kDa肽段，那么在做免疫印记分析的时候，需要买不同的一抗吗？如果买一种就可以，买哪种？我准备买Santa公司的一抗，但是同样是caspase-3鼠抗人的，有若干个，我不知道他们有什么不同，请大家指点一二。谢谢！matianzhong 抗体有很多分类啊，抗体特异性标记蛋白的那个部分，有的是C末端，有的是N末端，所以看你有检测 ...

lizzy514 请问细胞中总的GSK-3β应该包括磷酸化的GSK-3β蛋白吧?做WB检测细胞中GSK-3β和9位点磷酸化的GSK-3β(活性受抑制的形式)蛋白表达的变化,提取的是细胞总蛋白,那用GSK-3β抗体检测的GSK-3β的表达不仅仅只是非磷酸化的蛋白(活性形式)吧?万分感谢!!!坏坏的真心爱 有人回答吗？我也想知道zhanglin1229 不是，GSK-3β测出来是总的，包括磷酸化跟非磷酸化，有p-GSK3β抗体的。。本文 ...

sadows 看一篇文献摘要里多次提到PC12 N1,N1代表什么,是PC12细胞中的一型么?那一型呢?PC12不是只有分化的和没分化的么?望达人赐教.谢谢摘要如下:JNKs, also known as SAPKs, are activated in response to a wide variety of factors including growth factors, cytokines, UV radiation, and heatshock. In the rat pheochromocytoma PC12 ce ...

summer848822 急！！关于人外周血多形核白细胞PMN的分离及细胞趋化性研究？实验新手，不知道有没有哪位师兄、师姐做过关于 人外周血多形核白细胞（PMN）的分离培养以及细胞趋化性的研究？我在咱们园子里搜索了，只是大部分都是友情提供的，未亲身做过该实验，现在迫切的想知道有没有亲自做过该实验的老师朋友。希望提供经验帮助，有失败的战友愿意提醒我该多注意什么的也好，都不胜感激！！！:I很着急！关于人外周血多形核白细胞PMN ...

zhuyin27 A negative feedback loop existswhereby NF-κB drives re-synthesis of IκBαwhich promotes export of NF-κB from thenucleus to the cytoplasm. This processrelies on Cezanne, a deubiquitinatingcysteine protease that stabilizes resynthesisedIκBα by removingpolyub ...

萧湘 最近写论文，是关于GRPs和BAPTA的。哪位高人有关于BAPTA作用机制或与GRPs关系的图片，请赐教！急需！谢谢！(可以邮件形式发到我的邮箱：jiang-scorpio@163.com)kaige88 BAPTA是由Tsien博士发明的一种钙选择性螯合剂。（logKCa=6.97，logKMg=1.77）它基本的螯合单位和EDTA类似，只是两个脂肪氮被芳香氮所替代。因此，BAPTA在生理pH下不会被质子化。BAPTA的 ...

93311chen 本人在做荧光定量PCR是要用到NF-kB＆β-actin标准品,请问哪里有卖!?jmfan Sigma公司应该有卖，楼主可以直接上sigma公司网页，网址http://www.sigmaaldrich.com/Local/SA_Splash.html或者和sigma公司中国分公司联系，网址http://www.sigmaaldrich.com/Area_of_Interest/Asia__Pacific_Rim/C ...

longyue99 各位大虾好 ，试验需要活化和抑制 NF-kB的活性 ，我试着用HBx表达质粒转染增强其活性，用碧云天的BAY 11-7082抑制其活性，用pNF-kB-LUC检测NF-kB的活性变化，均告失败，哪位有其他办法？望不吝赐教lwjssry BAY 11-7082是肯定可以抑制的，莫非你的试剂有问题？换家公司的试试lwjssry 还有，你的荧光素酶质粒的插入片段是什么？longyue99 插入的是有3个NF-kB结合位点的序列panm ...