前沿科技及其它

医者为公 急急急求助：磷酸化和没有磷酸化的蛋白引物有没有差别？最近在做RT-PCR的前期准备，对引物不是很了解，想找磷酸化蛋白引物，但是在外文里面都只有非磷酸化的蛋白引物，想知道，他们之间是否有差别。谢谢！xxtlxx 磷酸化是蛋白水平的修饰，RT-PCR测的是RNA水平，是转录水平，概念都不是一个。bigbang_0_0 。。。。。。wenzonglu 蛋白怎么跟引物混到一块去啦？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

lxx071217 目前在提取蛋白时出现了些问题，希望能得到大家的帮助。我用的是ripa裂解液，加了蛋白酶抑制剂，将贴壁细胞刮下来，冰上继续裂解，期间vortex几次，最后12,000gx10min ;此时分别取上清和沉淀加入loading buffer煮沸5min，上样做WB。发现上清和沉淀中均有目的条带。现想咨询：离心后的沉淀是什么成分？（细胞核？碎片？还是不溶性蛋白）；如果是不溶性的蛋白加了loading buffer煮沸就 ...

lion0001 本人想知道国内哪里可以买到，大约多少钱一只。非常感谢哪位大侠能够相告。waals 为啥不上jaxmice买呢，好多个strain呢lion0001 谢谢waals。但是，好像jax只在台湾有公司。在大陆能够向台湾订购吗？请指点。冰辉水笑雪 您们好，请教大家一个问题，jaxmice公司卖的是不是已经缺失好的，还是，还得自己通过交配构建敲除老鼠？比如，我要一种HIF1α基因敲除的老鼠，jaxmice公司查到的 B6.1 ...

wh861017 求助：我用了三个综合性miRNA靶基因预测软件：starBase、miRecords、TarBase预测miR-155和miR-30a的靶基因，怎么每个软件预测的靶基因个数不一样，而且有的已经被证实的靶基因缺不在预测的靶基因范围内，我该相信哪个软件？急！！！！！charllu 你可以在PICTAR、MIRBASE、DIANA-MICROT或者Targetscan上再看看，一般这几个网站是比较权威的预测软件， ...

xiehechen 求详细关于检测细胞周期的流式细胞技术步骤 谢谢各位xiayuxue 期待中！sdjlmu Procedures of DNA Flow Cytometry (Cell Cycle Analysis)? Cell pellet (2-5X105 cells/sample)? Resuspend and fix cells in cold citrate buffer for 5-10 min at 4℃to make the cell density 2X105 cells/200 ml citrate buffer. (May keep cel ...

hbsyliuyang rt 请不吝赐教 感谢！david_xmu 没什么太大的区别，另外内皮细胞在不同的培养基中培养可能会有形态上的区别hbsyliuyang 谢谢这位达人！ 拜本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lanzhou3242 我想问一下，到底是Rhodamine 123黄绿色荧光强度越强，线粒体膜势能越高，还是相反？有的说Rhodamine 123进入活细胞的线粒体后显示的荧光是弱的或者是不发光的，而有的说被活细胞线粒体俘获后显示很强的荧光强度，我做药物对细胞凋亡的影响，是不是control应该很强，而随着凋亡的增加，其线粒体膜势能降低，所以黄绿色荧光强度更弱？fis1314 看得比较多的观点是正常的强，凋亡的弱zhuqu ...

lxqsh 现在有一株稳定细胞株，这株细胞在构建质粒的时候用的是带EGFP荧光（绿色）的载体，现在打算在这个稳定细胞株的基础上包病毒，可是包装体系里的空载也是绿色荧光，因为两种空载都是带绿色荧光的，不知道如果确定包病毒的效率及如何筛选稳定细胞？希望大家多多指教~david_xmu 有更具体的信息没？比如你的细胞株名称，病毒是慢病毒还是腺病毒？你的病毒包装质粒图谱？一般都会有筛选marker的，比如G418等。lxqsh 稳定 ...

iternol 怎么鉴定肿瘤耐药细胞株啊？求各位给点方法。yzg831 相关报道的文献是关键1. 分子水平：WB,qpcr鉴定相关报道的耐药marker2. 表型：直接用报道的药物剂量处理细胞，看其与对照非耐药株的敏感性反应，有没有不同涛声依旧神游天下 你有肿瘤耐药株么？测IC50啊，与亲本株进行比较本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongc ...

verarzhch 因实验急用，求一点质粒，检验细胞是否发生自噬。RFP-LC3或myc-LC3。谢谢！本人在上海，可购可换。bzy0222 我有GFP-LC3。yzg831 我们实验室也有的喜龙 bzy0222 wrote:我有GFP-LC3。请问您的质粒是购自哪里的，能不能用来转染RAW264.7细胞。bzy0222 我不知道呢，来自addgene06lzj 同求rfp-lc3质粒！gregoryhjk 呃，质粒这个东西还是牵涉到知识产权的。EG ...

小红赛 我目前在做药物靶向治疗肿瘤的课题，想在肿瘤细胞水平上以P53—MDM2为靶点，研究阻断MDM2或阻止P53水解时的信号变化及对细胞生长的影响，但目前不知道在P53—MDM2这个靶点上，有什么好的药物或者抑制剂，能用于细胞水平研究的，谢谢selleckchem01 在这个靶点下面两个抑制剂都可以用于细胞试验~Nutlin-3Nutlin-3 is a MDM-2 antagonist with an IC50 of 90 nM. It induces the exp ...

kfh2008 求助，请问，微量加样枪量程那里的三个数字不在同一个直线上，总是对不齐，怎么样才能调回正常。谢谢。dlzhangyu 要看你的牌子是什么，一般都附有一个小的塑料扳手用来调整。Eppendorf和Gilson的好像没有，他们的枪直接送修即可，他们有这项服务的。sakingoow 请问德国eppendorf如何送修呢，怎么找不到联系方式啊kfh2008 dlzhangyu wrote:要看你的牌子是什么，一般都附有一个小 ...

jiaoyang1978 蛋白质中有6个半胱氨酸，随机形成3个二硫键的方式有多少种？selleckchem01 这个不能用概率论来算的吧~jiaoyang1978 不是作实验什么的，是课后题，答案是30，不知道怎么算的，故求解法。dlzhangyu 就是用排列组合算的嘛，二硫键的形成需要两个半胱氨酸的残基上的硫原子，实际上类似这样，你画一个圆圈，上面有六个点，问连成三条线的方法有几种。那么你随便选一个点，连接另外一个点，有5种方 ...

liteng1117 最近才开始做磷酸化的Wb，选择抗体的时候发现，不同的磷酸化位点有不同的抗体，必须要找到刺激因素与磷酸化蛋白的位点吗？这个是特异性的吗dlzhangyu 一般是从文献里找，看别人选什么磷酸化的抗体就用什么。也可以直接看抗体的说明书。liteng1117 哦，谢谢大侠，还有个小问题，那个磷酸化的Wb，提蛋白的时候都必须要加磷酸酶抑制剂吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

pljj2046 各位高手，小弟想根据基因来查询其所对应的microRNA,请问用什么工具啊？TargetScan用不成了吧？**赐教~~~pljj2046 大家元宵吃完了给我讲讲啊~~~pljj2046 高手们快出现啊~~~帮帮忙啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

nedvedtnt 请问各位高手，有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒？因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？liubingood 表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理 ...

wltxj 求助：为什么转膜后会曝出GST的条带来，请高手指教! 多谢xindu19881988 是不是本身应该是融合蛋白的，但是会有GST单体存在？我也是这样，不知道为什么。xinyinhancidian 如果是这张胶上GST及其融合蛋白进行转膜，Western blot肯定会有非特异性条带，因为上样量太大了。做GSTpull down之前有必要对自己使用的GST融合蛋白的量做一个定量。纯化GST融合蛋白时，有些容易降解的蛋白质会 ...

beyond211 不知TGF-β 在培养液里的半衰期是多久，如果我要持续刺激72小时，请问期间是否需要换液并换上新的TGF-β ？slimmerchan 我的经验是不需要，不过到第三天可以看到一些漂浮的死细胞sesame0415 我是在48小时后换液的，在相关文献中看到的…本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

yangguili 酶标仪读数为ovrflw是什么意思Ex：494Em：521读板后显示的OVRFLW，请问是什么意思？wkclive 超过仪器的检测限ZoeYee 超过检测范围了 样品稀释过再测下就行了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

云向 大家好，我在提RNA ,但在配DEPC水时，和以往有点小不同，以前DEPC都是过夜才容的，有时甚至过夜也不容，但这次我刚加进去，大概等了一个多点就融了，中间我摇晃了三四次，我放在37度恒温箱中了，我很奇怪，这次为什么容那么快，会不会有问题，对了，我是在温水中假的depc水，大家谁还遇到过这种现象，不知道影不影响RNA的提取？外源RNA酶清除剂 没问题，本来DEPC就很容易溶于水。xinyinhancidian 多半是温水的缘 ...