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【求助】请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21 ？ 参与者：liqunfeng 请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21？？谁帮帮我啊 参与者：xiaolx 你在网上搜搜别人的实验中怎么检测的，不就知道了。 p38，我师姐做过免疫组化。 参与者：zhangyuelin1999 检测信号通路现在用的比较多的方法应该是Western blot，它是测细胞中的蛋白含量（半定量）的最好方法了，免 ...

【求助】哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 参与者：vensentgwx 哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 告诉我哪里有介绍也行，我自己在网上没找到。万分感谢！！！ 参与者：saurea 细胞膜是主要由脂质双分子层和膜蛋白构成，是一种选择透过性膜，在正常的生理机能状况下，能较好地阻碍外界离子和亲水分子的进入。但是当于其施加强度为KV/cm、持续时间为μs～ms级的电脉冲时，细胞 ...

【求助】测定NF－κB 活性 参与者：sandy99 实验中设计测定NF－κB 活性，我查的资料有以下几种选择： 1、EMSA。请教所设计的标记探针的序列？以及该实验的注意事项。（没做过） 2、抽提核蛋白，用P65抗体做Western Blot. 请问性价比较高的，好做的是哪个公司的抗体？还有啊，如果这个抗体用FITC标记过，是不是就可以用来做激光共聚焦实验？也可做WB？ ...

【求助】如何处理钙离子浓度变化数据 参与者：zufu 请教各位战友，我用荧光显微镜测血管平滑肌钙离子浓度变化，用药物刺激后可以得到钙离子时间浓度曲线，但各组之间差异较大。大家是如何处理这些数据的，因为要比较不同浓度药物刺激后钙离子的变化。 用药前钙离子稳定在一定水平，基本是一条直线，但用药后就是一个先升高后降低的曲线了，变化快，如何比较用药前后的变化，大家如何取数值并分析，是一段时间内的平均值还是 ...

【求助】fluo-3 的激发，发射波长疑问 参与者：wjg200022 最近我在测细胞内的钙浓度，用的是fluo-3 探针，但选多大的激发，发射波长很为难，有文献用的是488/515nm，有的用的506/526nm，我打算用流式细胞仪测，有做过这方面的给点指点，谢谢。 此外我找到一段原话：“Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙 ...

【求助】两个载体做共转染（瞬时转染）时是否需要有相同的复制起点\启动子吗?? 参与者：sunshine046000 各位大侠，我最近准备做共转染，用于分析目的基因的蛋白功能改变，查阅文献发现可以用含目的基因的载体和含有报道基因（b-gal）的载体做共转染以控制转染率。..请问师兄师姐们，如果我的研究目的在于分析目的基因（野生型和突变型）的表达情况以及后续的活性变化。是否最好用含相同启动子，增强子， ...

一、 试剂 1、 淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。 2、 全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青霉素和链霉素。 3、 环 ...

问：G418筛选预实验用未转染的细胞做，选10-14天内细胞死亡的最小浓度，然后将更高一级别的浓度应用于转染的细胞，是这样吗？ 答：G418是一种细胞毒性药物（氨基糖苷类抗生素），依不同浓度，对细胞有一定的抑制或杀伤作用，而拟转染的质粒上带有G418的药代酶，能降解G418，从而使细胞获得对G418的耐药性。也就是说转染后的细胞可以耐受G418，而未转染成功的细胞不能耐受G418，因而被杀灭或抑制 ...

实验步骤： 1、EB病毒液的制备 复苏B95.8细胞株，使用培养基为10% FCS RPMI-1640 逐步添加培养基至细胞长至对数生长期 细胞计数，调节细胞数量为1×10^6个/ml 在CO2培养箱中继续续培养10天，中间不换液 至第10天收集培养上清，1800rpm，4℃离心15分钟 0.22μm滤器过滤，1ml/支分装，冻存于液氮备用 2、病人外周血液的采集、分离 使用枸橼 ...

当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。首先，不 ...

外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于前两者的效率低且伤害较大，所以现在除了对于一些特殊细胞系，一般的转染方法都利用脂质体。 利用脂质体转染和其他方法一样，最重要的就是防治其毒性，因此脂质体与治理的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸 ...

一 原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。 滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。 铺有Ma ...

一、筛选之前确定G418浓度： 1、由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2、G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码3′磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素和 ...

细胞因子(cytokine)是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子的检测不仅是基础免疫研究的有较手段，同时在临床疾病诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测方面具有重要价值。 但是，由于细胞因子在体内的含量甚微，给细胞因子的检测带来困维，细胞因子的检测尚未在临床诊断上广泛开展，已知目前采用的 ...

THE PURINE NUCLEOTIDE CONTENT IN HUMAN LEUKEMIA CELL LINES Abstract: The HPLC method was used to determine the purine nucleotide (ATP ADP AMP GTP GDP GMP NAD+) contents and the values of the adenylate ...

Tumour suppressor p53 and Rb genes in human hepatocellular carcinoma. Aberrations of the p53 and Rb tumour suppressor genes were examined in 12 human hepatocellular carcinoma (HCC)-derived cell lines ...

Steven Finkbeiner Departments of Neurology and Physiology UCSF Protocol note: hood scgedule for day of transfection: - 6h gap - CELLS: Polylysine coat plates. add 5ml polylysine per 100mm plat ...

Principle: Lymphocytes are transformed to establish cell lines. Mononuclear cells (lymphocytes) from anticoagulated venous blood are isolated by layering onto histopaque. During centrifugation eryth ...

Chen-Ming Fan LabCarnegie Institute of Washington Prepare cell lysate as you would for Luciferase assay. Take 50uL of lysate and dilute with 100uL of 1X Reporter Lysis buffer (brown bottle at room ...

Seed cells at appropriate density (5x104/well for 3T3 MPAC BHK; 5x105/well for aTC1.6 bTC3) one to two days before transfection. Combine total DNA at 1ug /well with 600ul/well serum-free medium in an ...