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【求助】悬浮细胞如何转染？ 参与者：独钓寒江雪 请问有人做用悬浮细胞转染细胞么 具体转染过程是怎么样的呢 我打算用脂质体做转染 但是没有经验所以想请问一下做过这方面的人 非常感谢 参与者：DXY721 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达 ...

【求助】用fugene 做过转染的进来！！！ 参与者：yinqiscott 小弟准备用罗氏公司的fugene HD来做细胞转染，但是一点不明白，在载体和质粒无血清孵育15分钟后，加到细胞里，这时候的培养液应该用无血清的还是有血清的呢??? 参与者：shilly 我们用的是fugene 6，加到细胞里面的时候是有血清的培养液 说明书上说不影响，如果要换无血清培养液也要几个小时以后换。 参与者：scm ...

【求助】是否瞬转成功的检测 参与者：zhou0958 我现在想做瞬转，然后24，48，72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体，这种载体是不带荧光的.请问各位大侠，我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢? 参与者：DXY721 检测转染成功与否的方法很多，流式，RT-PCR，WB应该都可以 参与者：easticebird 是不是可以和有荧光的一起转染 ...

【求助】pIRES2－eGFP转染细胞有经验者请帮忙？ 参与者：水仙子2005 最近用pIRES2－eGFP做转染，可是看不到荧光（就连空载体也没有），由于实验要在3月底出结果，所以现在很急，准备寒假加班加点做。 有人说这个载体的GFP表达很不稳定，不知道有没有人用过这个载体，能否给点建议，对于好的建议愿以积分相赠 参与者：Crazyvirus 不知你是固定以后观察荧光还是转染后直接看的，若是固定 ...

【求助】GenBank使用的疑问 参与者：ctyw708 众所周知，引物设计常常用到GenBank，但是我查到的是mRNA的序列，用的软件Primer Premier 5.0，里面要输入的是DNA sequence，该如何转换，按照碱基配对原则进行变换（reverse complemently）就可以了？ 能利用软件对文献的引物进行评价么？ 谢谢路过的大侠！ 参与者：银色黎明 查cDNA序列嘛. ...

【求助】肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 参与者：greentrees 肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 肝素和硫酸类肝素都属于糖胺聚糖吗？ 不知道发在这里合适不合适，有知道的同道可否告知一下 参与者：liuzeyi2002 肝素（heparin）属于糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）类生化药物，是一类在结构上不均一、聚合程度上高度分散的硫酸多糖，一般指肝素 ...

【求助】关于葡萄糖转运实验的一些问题 参与者：qqhhrainbow 1、我买回来的氚-2D-葡萄糖，包装上标注的0.25mci……0.25ml in ethanol： water 9：1……这些信息如何理解，如果我要达到1 μCi/ml的加药量，应该从包装瓶里去出多少加入1ML水呢？ 2、还有就是最后收集细胞的问题，为什么有的实验是将 ...

【求助】caspase-3的检测方法 参与者：yansunqin 在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法 （1）：免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞 （2）：western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活花 （3）：RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理， ...

红血球脆性试验（RBC Fragility test）是血液实验室用以检查贫血疾病的项目之一，特别是针对遗传性球状红血球贫血。本次实验在探讨新鲜检体之立刻反应与经37℃孵育24小时后检体反应结果的相关性及经孵育测试的参考值，并对以不同的转速离心做评估。结果发现经37℃孵育24小时的步骤是不可省略的，因只有如此才可筛检出具轻微症状的病人；我们以25位体检病人求得经37℃孵育24小时结果的参考值，分别 ...

【求助】如何挑蚀斑？ 参与者：lxwgww 最近需要进行病毒的单克隆化，在论坛看到可进行挑蚀斑，受益很多！因为病毒是细胞结合毒，所以想参考细胞的单克隆化方法！ 看到有用滤纸挑细胞克隆的方法，不知道具体如何操作，是否可行？ 希望做过相关试验的战友能够提供细胞结合毒纯化的方法！？？ 参与者：smh9839 拿微量移液器，安黄枪头的，100μl或200μl的均可。 等蚀斑形成后，先在板子背面 ...

【求助】G418 原代细胞筛选 参与者：lxwgww 在论坛看了很多关于G418的帖子，正在做原代细胞转染的筛选，不知道是否可以使用G418 筛选？是否可以筛选到稳定的细胞株？？ 请做过相关研究的战友指教！！ 参与者：zhaolifei 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

【求助】关于CHO-K1细胞稳定转染和瞬转COS的问题急 参与者：sisars 各位大虾小弟我最近一直在瞬转COS细胞分泌表达上清一直没有表达也浓缩过再做ELISA WB 都没有啊时间挺长了实在等不及了就想稳定转染cho-k1细胞系通过MSX来筛选加压25UM的MSX 结果还不到两个星期CHO全死了不知道怎么回事如果有表达的话应该是分泌表达的怎么我总是做不出来呢很是一个郁闷阿 质粒纯度和浓度都应该 ...

【求助】如何运输细胞 参与者：fengxue19840112 我要从烟台把干细胞带回北京，路上大约需要20个小时，烟台这边的老师说可以把克隆挑下来悬浮在培养液里，放在一个EP管中带回去.然后再给它接种到新的滋养层细胞上.不知道有没有人这么做过，效果如何?可以的话请将答复发到我的邮箱里，非常感谢. 参与者：zhangzhanli2008 可以用干冰保存快运，一般１０公斤干冰３－４天应该没问题 参与者 ...

【求助】钙离子的测定 参与者：99shaoshuai 请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca2+，Mg2+离子？如果含Ca2+，Mg2+离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！ 参与者：yangchunzhang1 AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子，因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。 没 ...

【求助】骨髓瘤细胞的体内接种问题 参与者：qj_82 请教各位：骨髓瘤细胞如果要进行乳鼠或者大鼠的体内接种，是采用腹腔注射，还是皮下注射？还是直接注射在脾脏上？细胞密度要达到多少才有比较理想的接种效果？ 参与者：zhangzhanli2008 皮下１１０的７次方－３１０的７次方/ml 腹腔１１０的６次方/ml ...

根据作者E-mail地址，向作者索要。这是一种看似麻烦，实际非常有效的办法。为了更方便大家向作者索取原文，特意写了一份英文信函的模板，您只要把作者姓名、文章标题等等加上就成了。拜托您使用时稍加改动，避免千篇一律。信的内容如下： Dear Mr./Mrs.： ________（作者名） I am a graduate student of NanJing Medical University i ...

【求助】sf9，空斑试验，滴度测定 参与者：xiaoniziwendeng 我用的是bac-to-bac系统表达的目的蛋白。加上荧光底物后，96孔板读数，野生病毒和目的病毒相差不大，而且细胞感染后脱落严重，我该如何做呢？很希望能得到大家的帮助 参与者：yangea 以下问题请参考排除： 1、是挑取的单空斑进行病毒扩增的吗？ 2、荧光底物是否摸索了浓度梯度，即是否找到了作用最为明显的使用浓度； 3、 ...

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！ SP法 1）脱蜡、水化； 2）PBS洗2～3次各5分钟； 3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟； 4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复 ...