细胞周期/增殖/凋亡检测

Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法，一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性，方便后续数据分析，通常需要设置不同对照实验组。①样本不带自发荧光：组别Annexin V核染料样本类型空白对照--不做任何处理的细胞阴性对照++不做任何处理的细胞单阳对照1+-有明显凋亡的细胞单阳对照2-+有明显凋亡的细胞实验组++实验组细胞②样本带自发荧光组别Annexin V核染料样本类型空白对照--不做任何处理无自发荧光的细胞阴 ...

-基于阻抗方法实时、无标记、长期监测细胞表型- Maestro Z基于阻抗检测的细胞分析技术，使得实时、不间断且无需标记的细胞监测成为可能。对数据流的后续分析可以揭示细胞间互作和细胞-药物反应的动力学，可以更好地理解其机理而无需做费时费力的多次终点法实验。（可用于细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路(GPCR/CFTR)、细胞间相互作用 (屏障功能)、病毒学研究及细胞迁移等细胞表型研究。） 细胞表型是涉及基因和蛋 ...

由于细胞已经在生长培养基中悬浮，所以无需酶的作用使其从培养容器表面脱离，方法简单。材料准备：1、装有悬浮细胞的培养容器。2、完全生长培养基，预热至 37℃。3、37℃ 培养箱，充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气。传代流程：一、直接传代法1、待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；2、用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2～1 / 3；3、加入适量的新鲜培养基，继续培养。二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）1、将细胞悬液转移到离心管内；2、150 g 离心 5 min，弃 ...

贴壁细胞需要用到一种特定的试剂——蛋白酶，其作用是切断细胞和容器之间，细胞与细胞之间的相互粘连，用蛋白酶处理细胞的过程叫做「消化」，「消化」之后的下拨会形成单细胞并从容器底部掉下来。最常用的蛋白酶是胰蛋白酶。材料准备：1、预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS 液和胰蛋白酶的瓶子放入 37℃ 水浴锅内预热；2、用 75% 酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；3、正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；4 ...

细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程，通常表现为核浓缩，起皱，膜发泡以及DNA片段化。WB是研究细胞凋亡机理的基本方法之一，但是WB也不是谁都能做成功的，因为有可能你的第一步就做错了！用WB做细胞凋亡研究样品制备是第一步，样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备，看你是不是这样做的：自配裂解液或者购买RIPA，加上样品研磨啊研磨，孵育啊孵育，然后离心扔掉沉淀（RIPA不可溶组分），取上清（R ...

一、实验材料NCI-H1299，购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家（货号）细胞培养瓶FALCON 中国（353014）Penicillin/streptomycin solution（KGY002）0.25% Tripsin-EDTA（BK-E3076）PBS（BK330-2）胎牛血清GIBCO 美国（10270-106）1640 培养基Hyclone 美国（SH3080901）Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒二、实验 ...

六、MTT 结果分析关于如何计算 IC501、改良寇式法：lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)Xm:lg 最大剂量I:lg(最大剂量/相临剂量)P: 阳性反应率之和Pm: 最大阳性反应率Pn: 最小阳性反应率举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得 MTT 值如下公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率抑制率=1-加药组 OD 值/对照组 OD 值，如对于 100ug/ml 的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下：代入计算公式：Pm=0 ...

五、MTT 法实验步骤1. 胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至 5~10×104/ml。细胞详细计数方法请参照易生物实验技术中的相关文章。对于初学者而言，要使细胞达到 5~10×104/ml 往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。以一般细胞培养常用的 25 cm2 为例，1) 细胞密度在长到约 80%~90%（下图所示为 80%~90% 密度时细胞的大致状态），消化离心收集后，将上清去掉，加入 3 ml 培养基使其 ...

四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂。市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g1.1 对于 100 mg 这样的小包装，厂家都是将 MTT 放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如 100 mg 用 20 ml PBS 来溶解。具休做法：预先在 50 ml 离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入 20 ml PBS，从中先吸取 500-1000ul PBS 装入含 MTT 的小管中，吹打若干次后将其移入 50 ml 离心管，然后再混匀。可以重复 ...

一、MTT 是什么MTT 是一种粉末状化学试剂，全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、MTT 法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖 ...

MTT 原理MTT 全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原 MTT，同时在细胞色素 C 的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可 ...

过去十年，几乎每个生命科学者都知道“凋亡”这个概念且有意无意地将自己的研究工作与之挂钩，催生了大量文章。同样我们有理由坚信未来十年“自噬”也会变成另一个“万金油”和生命科学的“闪亮新星”。下面将为大家介绍“自噬”的精彩内容。细胞自噬自噬（Autophagy）是普遍存在于真核细胞中的一种高度保守的代谢过程，是细胞内的一种“自食（Self-eating）”现象。它作为细胞内的主要降解途径，将胞内物质运输到溶酶体内降解。它主要有 ...

mmsong1987 我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒，想研究某种材料的细胞毒性，看其是否会诱导细胞凋亡。之前做过MTT之类的检测，结果显示材料基本无毒性。由于条件限制（流式细胞仪在我们学校另一个校区）不能及时进行检测，前两天进行了一次实验，是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理，检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态，个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关（悬浮在An ...

zasnaagua 检测细胞周期实验中，s期增多，说明该种处理是抑制细胞增殖还是促进细胞增殖？谢谢bigbang_0_0 当然是抑制，因为S期的主要任务是DNA复制，DNA复制本身就是细胞增殖的必要条件。但是仅仅通过细胞周期分布分析不足以证明细胞的增殖速率的改变，MTT或者cologenic assay才能提供直接的证据吴佰霖 个人认为是另外一种阻滞，建议做MTT验证zasnaagua 那请问做了MTT以后，发现该种处理确实使 ...

自助者wl 之前看了坛子里讨论自噬的帖子和一些文献,感觉大家比较倾向于自噬在损伤过程中起一些积极的保护作用,我想问问大家目前有无研究显示,或者大家认为损伤过程中发生的自噬能对修复起阻碍作用,尤其在神经系统损伤修复中,对内源性干细胞起不利的作用?有兴趣的请进来讨论下!wangkai0418 有些干细胞中的自噬促进其分化niocle 我认为，如果按你说的做，对于临床研究意义会很小的，不受关注。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

zhao7253 我想在肺组织做药物抑制平滑肌细胞增殖的细胞周期检测，药物作用于微管导致细胞复制停止于G0/G1和G2/M期，怎么选择周期蛋白呢？此药物能稳定已聚合的微管和增强微管的装配，因此导致细胞复制大部分在G0/G1 和 G2/M期受到抑制，急！！！！！！！！！！！！！！谢谢zhao7253 要能做WB和PCR的，谢谢！！！！！zhao7253 谢了 我再研究下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

yanjing2001 我用药物处理细胞后，流式检测细胞周期，G1期增加，S期减少，G2基本没有什么变化问题一：这是说明药物把细胞阻滞在G1期吗？问题二：把细胞阻滞在G1期与G1/S期阻滞是相同的意思吗？问题三：想进一步通过western blot 检测cyclin确定G1期阻滞，应该检测cyclin d,还是cyclin d1呢，为什么请大家帮忙！sunzhihong490 1.这的看你的细胞组织在G1起的百分比了，随着药物浓度的增加 ...

wzmclf 各位，谁有NF-kB参于凋亡途径这方面的图，急用。谢谢有的话能给我一份吗chenyumei_ttkj Nuclear factor kB (NF-kB) is a nuclear transcription factor that regulates expression of a large number of genes that are critical for the regulation of apoptosis, viral replication, tumorigenesis, inflammatio ...

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...