细胞培养

一、细胞复苏和接种 1. 37℃预热大鼠间充质干细胞培养液（RM-001）和基础培养液（RM-001B）。 2. 从液氮中取出细胞产品管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 3. 在生物安全柜中，用75%的酒精擦拭产品管外壁。 4. 将产品管中的细胞移至15 ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（RM-001B）4-5ml混匀 ...

随着细胞培养技术在大量生产疫苗和生化制剂领域的不断发展，对细胞基质的需求量越来越大， 迫切需要发展大规模培养细胞的技术。大规模的动物细胞培养开始于本世纪50年代，经过多年来的研究，人类对动物细胞培养技术进行了大量的研究开发，取得了很大的进展。通常用于疫苗和某些生物制剂生产的原代细胞核二倍体细胞属于贴壁生长细胞，因此贴壁生长细胞的大规模培养技术一直备受关注。 贴壁生长细胞的大规模培养 ...

1. 材料与方法 1.1 实验动物及试剂 出生7-9d大鼠幼仔、手术器械、DMEM培养基和胎牛血清FBS、0.125%胰蛋白酶、PBS等包被：Poly-L-Lysine多聚赖氨酸，储存液浓度为4mg/ml，超纯水稀释（1:300）。使用时浓度为13.3ug/ml。24孔板每孔加50ul室温孵育1h后吸去，超纯水清洗后吹干。 DMEM培养基10ml，添加剂：谷氨酰胺(146.15)2 ...

一、 神经干细胞的分离和传代 无菌条件下取新生SD大鼠(出生48h内)脑组织，D-Hanks液充分漂洗后，在解剖显微镜下剥离脑膜，准确分离海马，用眼科剪将海马剪碎后，再转移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的无血清培养基，吸管吹打机械分离制作单细胞悬液，台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞浓度为5×104~5个/ml，置于24孔培养板中培养，每孔 ...

细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下，体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50 年，现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫，肿瘤及细胞工程的重要手段。在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞（此时称同核 ...

1 材料 1.1 动物 出生后 1-4 天 SD 乳鼠 15 只。 1.2 试剂 低糖 DMEM、胰酶(含 EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精。 培养液：培养液(DMEM，新生牛血清，青链霉素)。 1.3 手术器械和仪器 铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、 ...

1 材料 1.1 动物 出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。 1.2 试剂 PBS、培养液(低糖DMEM，新生牛血清、青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶)，碘酒和酒精绵球。 1.3 手术器械 眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25cm2 ...

一、 实验材料： 6-8周龄大小鼠；剪刀，镊子，灌流用针头，连接管，玻璃平皿，细胞筛，冰盒 二、实验方法： 1. 培养用液 洗涤培养基：DMEM 基础培养基：DMEM/F12 2. 消化用液 前灌流液T1 ;后灌流液T2 3. 培养基本操作方法 a. 将小/ ...

细胞培养是指从体内组织取出细胞，模拟体内环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞体外培养主要用来获得细胞群或得到其次生代谢产物，如人造皮肤、人造耳朵、克隆抗体，或者进行药物药效、有毒物质鉴定等。动物细胞培养需要严格的条件：A) 无菌无毒培养环境—保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防 ...

原理： 苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。 配制试剂： 1.苏丹红Ⅲ染色液：将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用； 2.甲醛钙固定液：将10ml甲醛和1 ...

一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养， 即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂 ...

1. 将 15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的 PBS 溶液中储存。（注：4℃下最多贮存 24 小时，室温下不超过 6 小时，否则废弃） 2. 用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的 PBS 溶液冲洗 3-5 次，将污血冲洗干净为止。 3. 用手术钳夹紧脐带下端，加入 15ml 的胶原酶（1mg/ml）室温下消化 15-20分钟，并不时上下摇动脐带。 4. 消化完后，将下端手术钳松开，消 ...

一. 细胞复苏与培养 将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞 ...

一、原理 在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL一60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜处理后的HL一60细胞按粒系途径定向成熟分化，同时细胞的增殖力降低，几乎全部细胞丧失了软琼脂中形成集落的能力。因此，这种 ...

实验器材 手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。 实验试剂 无Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞（MEF）生长培养基：高糖DMEM加10%FCS。 实验动物 孕期14至16天的孕鼠 实验步骤 1. 处死孕鼠，置于75%酒精 ...

血管新生和在旧血管里构造新血管对在胎儿的生长、创伤治愈、肿瘤增殖及转移等各种过程中有重要作用。特别它是肿瘤生长、转移的必经阶段，一直以来不少科研人员将血管新生的抑制剂用于抗肿瘤药物的研究。至于血管新生促进剂，它主要是用于治疗血流灌注不足等诸多症状，但实际应用不多，主要是因为除了从生物体提取的增殖因子以外，科研人员很少能识别出其他有此作用的物质。血管新生治疗在血流灌注不足等方面被寄予厚望。血流灌注不足是由于糖尿病患者的慢性闭塞性动脉硬化、脉管炎病及其他动脉硬化等各种血管闭塞等引起的。但是现在进行的血管新生治疗只限于向患者注射增殖因子和进行基因治疗等方法，众人期待能研发出可以替代这些方法的稳定、便宜的低分子。本文作者及研究团队介绍新型低分子化合物2-Cl-C.OXT-A在血管新生方面的作用。

大家知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。 应该如何进行正确的溶解呢？ 下面我们以Recombi ...

细胞培养中的无菌技术： 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔 ...

1.实验目的： 通过细胞的体外培养来检测产品的生物性能是否达到要求。 2.实验原理： 体外培养的细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。通过贴壁细胞的传代培养，观察细胞的生 ...

近日，德国马普学会法兰克福脑研究所和弗赖堡免疫学与表观遗传学研究所的科研人员利用末梢神经干细胞成功培育出了中枢神经细胞，而且在其刊登在2011年第31期《神经科学》杂志上的研究论文中称，在该新方法中他们没有利用基因技术。 研究人员先将末梢神经干细胞置于特殊的具有合适环境条件的细胞培养皿中，其后围绕脑中枢神经细胞逐渐发育形成了新的支持细胞髓鞘。研究人员发现，温度和营养盐浓度等外部环境因素对于神经干 ...