细胞培养

Hela细胞传代步骤 1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。 3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。 ...

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培养293细胞应注意以下几个方面： 1.用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。 2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养液可加入5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。 3.消化所用胰酶可选择 ...

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。【材料】1. 常规细胞培养仪器设备、恒温水浴振荡器。2. 培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2. 培养液（DME ...

细胞培养板的选择和使用

培养细胞应该养成的一些好习惯

基础篇-无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应 ...

1.滤器高压消毒时滤膜变小，为什么 丁香园网友dongwp的观点为：旋紧压住膜后高压灭菌就可以了，醋酸纤维膜会收缩，尼龙膜会好点。 2.滤膜破了，真空泵惹得祸？ 丁香园网友worm27的观点为： 防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在 ...

1.针头滤器的使用 丁香园网友heyj的观点为：用滤膜孔径为0.22um的一次性针头滤器过滤胰酶，一次可以过滤100ml。如果想一次性过滤完可以准备1-2个备用的。注意在配胰酶溶液时尽量完全溶解，否则未溶的颗粒会堵住滤孔影响过滤速度。本人认为过滤效果与滤过的液体量无关。 丁香园网友ssl3304的观点为：过滤0.25的胰酶，一次可以滤1L，没有问题的，培养基最多300-400ml，总之一定要充分溶 ...

1.小过滤器如何清洗 丁香园网友bnucell的观点为：先用针管反复抽吸蒸馏水，之后超声20分钟左右，最后用蒸馏水浸泡5个小时以上，取出，40度左右烘干即可。其中的垫圈不要烘，自然晾干就可以了。 丁香园网友飘泊的观点为：小滤器使用后的清洗、消毒和其它可高压的塑料制品（聚丙烯、聚酯和聚偏二氯乙烯等等）一样，但聚乙烯不能高压。A. 流水反复冲十遍，干燥（高压时的温度是多少？之后还得干燥，垫圈我们同样拿 ...

1.不锈钢正压滤器 丁香园网友zhyjd的观点为：买不锈钢正压器时，看看厂家是否给带气囊，如果带就没有必要买了，其实买膜的地方他都会有不锈钢正压器的，滤器先要洗干净，装好滤膜，包装起来高压后，在超净工作台上操作。 2.玻璃滤器 多年前（80年代）刚开始做细胞培养时，使用的是G6型玻璃滤器用于除菌过滤培养液，使用前必须经过泡酸，自来水清洗，蒸馏水过滤，然后再包装，高压灭菌后用于过滤培养液。 3.过 ...

丁香园网友卡列宁的微笑的观点： 用Langendorff灌流消化（胶原酶II）只能取得心肌细胞。建议直接将心脏剪碎，成纤维细胞我们这里一般采用0.05％胰酶消化。无菌条件取出心脏D-hank's液（PBS也可）漂洗，剪碎心脏加入5倍体积消化液，37C水浴3－5min，反复吹打，静置，待自然沉降后弃去上清液。剩余沉淀再加入约5倍体积0.08%胰蛋白酶及0.1%胶原酶II混合液，反复吹打，大约10分钟 ...

Abstract AIM:To study the effect of a varying concentrations of ars enic trioxide on human hepatoma cell line BEL-7402 cultured in vitro and its mechanism of action. METHODS:The BEL-7402 cells were tr ...

Introduction Quality is important in all aspects of tissue culture since the quality of materials used i.e. media and other reagents) will affect the quality of the cultures and products derived from ...

1. Dilute 2 ml of 4000 U/ml Collagenase D as follows: 1 ml into 9 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=400U/ml) and 1 ml into 39 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=100U/ml). Put on ice. 2. Place 5 ml of the 100U/ml solution in a 10 ...

Material Instruments Solutions 1 Curve Scissor ...

Procedure 1. Pour buffy coat (see Hint #1) from the bag into a 125 ml conical polypropylene centrifuge tube and dilute to 90 ml with sterile endotoxin-free PBS. 2. Add 15 ml of sterile Dextran/PBS an ...

METHOD: 1.Established hybridomas and other cell lines can be stored in liquid N2 using this method. 2.Have everything ready before you start working with the cells (i.e. cool media label vials prepare ...

Freezing Cells: 1.Trypsinize cells and harvest in the normal way. 2.Count a 200 μl aliquot and determine the total cell number.From thiscalculate the volume of media required to give a final freezi ...

The kitchen makes Tris TD Tryp/TD PBS and VE. Tris is a fairly complex Tris-buffered physiological saline solution. It is used to wash cells and is preferable to TD unless you need a Ca2+/Mg2+ free s ...