细胞培养

一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液，38℃±1℃消化，消化过程中不断 ...

1、肿瘤细胞培养问题： 问：我养的肿瘤细胞，传多少代以后不能用、需要重新复苏新的呢？我总觉得细胞形态不好，但长的还挺快！ 答：初代培养的细胞在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存，则需反复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10-50次左右，细胞增殖 ...

脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的重要成分，与外周血管内皮细胞不同，它具有高跨内皮阻抗（transendothelial electrical resistance，TER）、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有的特征，从而使血脑屏障形成一个限制大多数极性分子和蛋白质运动的选择性低渗透性的屏障。由于体外 ...

材料： 小鼠 器具： 饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管（15/50ml）、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器 试剂： DMEM（含血清）、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS 准备： 酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。 操作步骤： 1、将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS的平皿中。 2、 ...

器械： 饭盒、烧杯、弯头解剖剪（2）、小镊子（2）、平皿（4）、毛玻片、滤网、离心管（15ml）、移液管、培养瓶、废液缸、PE手套、橡胶手套、冰盒 溶液： PBS、DMEM（含血清）、DMEM（free）、胰酶 动物： 小鼠 准备： 用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束，提前半小时将培养液、胰酶37℃温浴。 培养过程： 1、两个圆皿中加入5ml的PBS培养液 ...

1、材料 猪甲状腺由锦州市屠宰场提供。F-12培养基（sigma公司）；胎牛血清（天津血液研究所）；胰蛋白酶（sigma公司）；胶原酶Ⅳ（sigma公司）；牛TSH　　　　　　（sigma公司） 2、方法 杀猪后迅速取出甲状腺1～2个，置于盛有75％酒精的烧杯中，用冰盒送至实验室（1小时以内）。立即置于pH为7.4的PBS缓冲液（含青链霉素）中，反复漂洗，直至漂洗液清澈透明。去除包膜及结缔组织，用 ...

Material and method： Material : 1、培养皿、培养瓶、烧瓶、试管等。 2、分离组织需要的眼科剪子、眼科镊子。 3、5%CO2孵箱、PH计、95%氧气源。 4、36电动恒温水浴。 5、培养液、各种缓冲液及添加剂DMEM高糖培养基、Hank’s缓冲液 、20%胎牛血清，转换生长因子（TGF-β1）(5ng/mL)、胰岛素-转铁蛋白-硒（10ug/m ...

1、麻醉后消毒，下腹正中切口于膀胱颈（结扎处远端约1~2cm），严格无菌操作取出标本、手术台位于超净台旁 2、在超净台，40u/ml庆大霉素溶液中浸泡5分钟 3、生理盐水漂洗1次 4、D－hanks液漂洗1次 5、放入D－hanks液中，除去粘膜、粘膜下及浆膜 如果是Shame组兔，以10ml注射器抽取约8ml D－hanks液，于粘膜层下注射起泡后，剪去粘膜层，直接剪取平滑肌组织，弃浆膜层及其上 ...

实验材料： 眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿 实验步骤： 1、在超净台内用10ml的离心管分装5ml的1×PBS（已高压灭菌）。 2、手术台上取患者发生动脉粥样硬化改变的病变动脉，分放入准备好的PBS中，拿回实验室在超净台中，无菌条件下剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其剪成1×1mm大 ...

取材及胶质细胞的混合培养 1、P2 SD大鼠经低温麻醉后以碘酒和75％乙醇消毒，无菌操作下，断头放入预冷的D-Hanks液中，在解剖显微镜下取大脑皮层并除去脑膜。 2、剪碎组织成1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。 3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的MEM＋10％FBS（Glial Medium，GM）的离心管内终止消化液作用5min。 4、吸 ...

液体配制： 硼酸硼砂缓冲液：0.05M四硼化钠45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4； 胰酶－EDTA消化液：胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡盐液定容至100ml 所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干备用。 操作步骤如下： 1、孕16d SD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依 ...

一、实验器材： 手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。 二、实验试剂： 无Ca+2和Mg+2的PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞（MEF）生长培养基:高糖DMEM加10%FCS。 三、实验动物： 孕期14至16天的孕鼠 四、实验步骤： 1、处死孕 ...

一、材料 所需液体：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。 试剂 Trypsin SDS DMEM 均购于 Sigma Chemical Co.小牛血清购于杭州四季青生物制品有限公司，其余均为国产分析纯。 取鼠：标准SD大鼠，鼠盆用棉铺好，取鼠。 物品：白大衣、饭盒 小剪子、小镊子（4套）（一套剪皮肤、一套开胸取心，一套剔除心缘纤维组织，一套剪碎心脏 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

一、细胞培养基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。 在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在 ...

血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考： 1、保存血清最好的方法是什么？ 我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。但是，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2 ...

简介： 这是一本很实用的细胞培养方面的书！ 【书籍名称】：《细胞培养》 【书籍类别】：实验技术 【书籍格式】：PDF 【书籍来源】：主编司徒振强 【书籍大小】：6.4M 【书籍描述】：内容简介 第一章 细胞培养的一般知识 第二章 培养室的设备、设置和准备工作 第三章 培养用液及培养基 第四章 基本技术 第五章 正常组织细胞的培养 第六章 肿瘤细胞的培养 第七章 培养细胞生长状况的观察 第八章 细 ...

1、侵袭实验与转染细胞问题。 问：我要做侵袭实验，但我做的是瞬时转染的贴壁细胞，我想请教各位，瞬时转染后多长时间，可以消化细胞进行transwell小室的细胞接种？ 答：最好是24小时，我们科有两个都用二十四小时，但也有文献报道说用48小时。如果是稳定转染，则需要在对数生长期接种细胞。 2、原代成骨细胞培养不贴壁问题。 问：我用新配置的0.25%胰蛋白酶消化骨片30分，然后用胶原酶消化90分，培养 ...

一、关于血清使用的几点建议： 1、血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中(或血清瓶中)，由于血清解冻时体积会增加10％，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。 2、一般公司所提供的血清一般为200ml和500ml装量，因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清：-20℃&rar ...

问：以前拿回细胞后，传代、冻存后复苏过几次都没什么问题，最近因实验室孵箱污染，清洁消毒细胞室后，重新复苏，结果连续复苏6支，细胞均未贴壁，今晚复苏6小时后观察有一瓶相对贴壁细胞数较之前复苏失败瓶多，但贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好！急求各位大侠会诊指导！ 答：juventus2004认为复苏过程没有问题的，是否是从液氮拿出直接放入温水？培养箱问题，二氧化碳浓度？培养基问题？PH值？要么加 ...