细胞培养

美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细) 3T3-L1 Differentiation Protocol MATERIALS Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose with L-glutamine with pyroxidine HCl witho ...

一、试剂和缓冲液配制 1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶） （1）解冻胎牛血清 （2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶） （3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏 （4）在-20℃冰冻馏份 2、磷酸盐缓冲液（PBS） （1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术） （2）900ML蒸馏水 （3）2克葡萄糖 （4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在 ...

一、有限稀释法 材料： a、96孔细胞培养板等； b、HT培养基； c、活力强的杂交瘤细胞； d、小鼠腹腔细胞。 方法： a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。 b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。 c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤 ...

实验步骤 （一）、取SD 大鼠一只，实验时断椎处死。 （二）、在无菌条件下快速自肛门上2cm 取结肠10cm 左右，生理盐水中反复灌肠冲洗。 （三）、移入含300U/ml青霉素、300U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡，肠段内外各15min。 （四）、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中（培养板预先铺上705胶），在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行 ...

PC12传代的消化 丁香园wangpengljr的问题： 我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ...

丁香园ivy_mayan的问题： 在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？ 丁香园george的观点： 1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。 2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： 未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？ 丁香园sudajyou的观点： pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。 丁香园忘记宝儿兔兔的问题： 关于pc12细胞即鼠 ...

丁香园myl0605的观点： 前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助! 培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。 分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ...

丁香园网友doctorwyz： 你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。 首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权 ...

细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应 ...

丁香园网友simon的观点： 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央 ...

丁香园网友ronghong_2000的观点： 我们实验室最近一次的情况: 我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作 ...

丁香园网友juventus2004的观点： 最近帮同学养细胞系，也看到以前有人发关于黑胶虫的贴，我是养心肌和海马神经元，感觉应该没有黑胶虫，有的话，请问有相关抗体或荧光标记吗？！ 个人认为，可能大家用得血清，而且没有处理好，导致的，我这里一直用国产血清，胎牛的，只要用得好，我就猛要求多买几瓶，虽然老师还是不让多买，如果大家用得进口的，当然好。 解冻血清，要先放入4度冰箱，而且要不时地摇晃，均匀的， ...

概述 凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。 物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。培养环境中的物理因素，如温 度、放射线、振动、辐射(紫 ...

取一个注射器针头， 针头头部都会有一个斜面，把针尖背对斜面的一方弯曲成90度，记住只是针尖部位，形成一个小倒刺状。取爬片的时候把培养板放倾斜，可在板子下支一个东西，左手拿小镊子，右手拿针头。用针头头部弯好的倒刺，去勾爬片，很容易就会勾起来，而且不会伤片子。再用镊子把片子夹出来。速度比原来提高很多，取一个板子的爬片只要一分钟。 说的不是很清楚 画张图给大家吧 ...

丁香园网友kj7156084的培养方法： 本室的PC－3来自上海细胞生物所，种是ATCC的。 以10％FBS＋1640或F12培养，0.25%胰酶消化。塑料瓶或玻璃瓶都可以，当然，前者效果较好。复苏时最好用塑料瓶。 5－7天传一次（1：2），2－3天换一次液。尽量高密度传，因为PC－3细胞喜欢扎堆长，如果过了两三天细胞长得不均匀，可以消化离心一下。 传代后一到两天不要动它，要有耐心。 人前列腺癌 ...

丁香园网友yql1977的问题： 各位朋友，今天跟我师弟讨论一个问题，神经元OGD时是否要将缺氧液配成酸性的，我认为酸中毒和高钾血症等并发症是机体缺血后造成的后果，因此不必人为制造酸中毒，而且关于神经元OGD的大量文献也没有特意提及缺氧液的PH值。而我师弟认为在体情况下缺血时会伴有酸中毒及高钾血症，因此造模时应该造成酸中毒甚至高钾的环境，不过他做的是心肌，关于心肌的文献大部分都说明缺氧液PH在6. ...

HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒培养等方面的研究研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性，还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌细胞培养的最佳条件做一简单综述。 1、HepG2细胞的复苏条件 （1）复苏温度的选择 唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏：快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解，溶解后马上转入 37 ℃水浴箱，手工 ...

丁香园网友roseluo425的观点为： 1、0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化 2、消化前后一定要轻柔吹打 3、重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次） 4、种板密度要合适 5、当然血清，板都要进口，别图便宜 6、别忘了检查CO2温箱的情况 丁香园网友ljm123的观点为： 1、首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的以我的经验来看活力是较好的皮肤看起来是暗红色的再大一点的话皮肤变厚变 ...

纯化病毒第一步 剪碎法CEF的制备 实验前准备 PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基 实验步骤 Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室 Ⅱ 准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出， ...