细胞百科

东南大学附属中大医院麻醉科 汪福洲 景亮 南京210009巨噬细胞移动抑制因子（MIF）作为一种多能细胞调节蛋白，是与多种疾病有着密切关系的“新型分子”。尽管最初因MIF能够抑制豚鼠巨噬细胞随机移动而得名，但随着MIF在机体生命活动中一系列生理及病理生理作用的相继确认，已激起了对其在体内多种疾病病理过程中重要调节作用的高度关注。现今认为，MIF是集细胞因子、神经内分泌激素和酶特性于一身的多效能蛋白 ...

1）分离外周血中的单个核细胞（PBMC） 1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温中，水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC，淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层，又成为棕黃层。 2．吸去最上层的血浆，收集血浆层和淋巴细 ...

1）研究细胞因子mRNA的方法 绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。 检测细胞因子mRNA的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、Northern印迹杂交、斑点杂交、逆转录聚合酶链反应、原位杂交。 2）研究细胞因子的免疫检测法 免疫检测法主要有放射免疫检测法、酶免疫测 ...

摘要　脂多糖（LPS）通过与膜受体CD14作用将信号从胞外传到胞核而刺激多种细胞合成和释放TNF-α、IL-１和IL-6等生物活性物质而表现复杂的生物学活性，但其详细机制尚未完全清楚。本文就近年来对LPS激活巨噬细胞的信号传导机制的研究作一简要综述。　　关键词:内毒素；信号传导；内毒素结合蛋白；蛋白酪氨酸激酶　　内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成份，其化学本质为脂多糖，为细菌死亡或活 ...

1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段1．取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2．加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加入60％（v/v）甲醇溶液，轻轻悬浮细胞，4℃固定细胞15分钟。4℃离心500×g 10分钟，去上清液。3．加入0.1ml 0.1 ...

1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞1．制备AET-绵羊红细胞1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反应30分钟。3）用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次，每次离心500×g，10分钟。用含10％小牛 ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。 6．5％正 ...

1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。 2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，稀释后直接在显微镜下计数效应细胞和靶细胞的结合率，即平均每100各淋巴细胞中结合了靶细胞的效应细胞的数目。 3．其 ...

1）从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞 1．取6周左右的小鼠（或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔），剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml（豚鼠20ml，家兔200ml）无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4％淀粉肉汤。3～4天以后收集腹腔细胞。 2．如要收集腹腔静置巨噬细胞，不注射刺激物，直接从这一步开始。放血处死动物，以减少腹腔中的红细胞。消毒腹部，沿腹中线注入3～4ml（豚鼠20～40ml，家 ...

1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。 2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。 3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。 4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。 5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。 6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。 7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。 8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm ...

1．血液制备：柠檬酸（Citric Acide）或肝素抗凝取血1～2ml，分装入管中，每管0.5ml全血，置于4℃冰箱中30分钟。 2．EBV病毒转化：从液氮中取出冻存的0.5ml全血，在37℃水中迅速解冻。 3．将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合，2500 rpm离心2分钟，弃上清，用含20％的胎牛血清、青、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640生长培养基重悬细胞。 4．加入0. ...

1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。 2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。 3．37℃，孵育1～4h。 4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。 5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的 ...

该方法适用于新鲜和冷冻标本 1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片，用缓冲液或培养液浸湿。 2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。 3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中，盖上盖子，将Medicon 插入到Medimachine中。 4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。 5.用注射器通过 Medicon上的注射器接口将上清吸 ...

线粒体膜电位（MMP）：使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低，如双氰基-双己氧基羰基靛蓝，它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时，细胞的荧光就会减少。 磷脂酰丝氨酸（PS）在细胞表面的分布情况： PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中，PS残余物会曝露在细胞表面。这种变化可以通过复合蛋白钙依赖的磷脂结合蛋白V与PS结合来进行检测。所使用的细胞必须是未经修 ...

1.保存血清最好的办法？ 我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。若你一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2.如何解冻血清才不会使产品质量受损？ 我们建议您将血清从冷冻箱中取出后，先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。 3.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？ 血清中沉淀物的出现有许多原因 ...

1．培养液准备：取15ml培养瓶数个，每瓶内分别充入5ml培养液（pH 7.2），内含：1640培养液（含10％～15％小牛血清），PHA 0.1ml，青霉素100单位和链霉素100微克/毫升 培养液 2．抽血针管准备：取2～5ml针管一支，在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中安装好注射器，无菌抽肝素（100 U/ml BBS）少许湿润针管，如动作迅速不用肝素亦可。 3．采血：用棉签75％酒精给患者 ...

Ⅰ、样品准备　准备以下一种或几种样品A、组织单细胞悬浮液（如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞）B、组织培养细胞C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞Ⅱ、反应体系－DNA低渗缓冲液柠檬酸三钠 　 　　0.25gTriton-X 100 0.75mlPropidium iodide 0.025g核糖核酸酶　　　　 　0.005g蒸馏水　　　　　　　　250ml我 ...

直接培养法：（适于培养含纤维少的软组织）1．在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。2．把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，置试管架3～5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2～3次。3．末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3～4层无菌纱布滤入另管中。4．调整好适宜密度，接种 ...

1）染色体显带 显Q带法 1. 漂洗：取经过干热预处理或已老化的染色体标本，置于pH6.0缓冲液中浸5~10分钟。 2. 染色：浸入pH6.0的GM或QD染液中5~10分钟。 3. 漂洗：浸入新鲜pH6.0缓冲液中漂洗两次，每次5分钟。 4. 观察：向标本染色体面滴1~2滴新鲜缓冲液，覆以盖片（避免出气泡），置荧光显微镜下观察。 显G带法 胰酶-Giemsa混合显带法 1．预处理：取中期染色体标 ...

1）尼龙毛柱的制备 1．取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。 2．称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约5～6cm。此柱可分离约2×107细胞。将柱置－20℃可保存2～3个月。 2）分离细胞 1．取分离的单个核细胞，用细胞培 ...