细胞百科

Thaw tubulin Adjust solution to a final buffer concentration equivalent of glycerol PB Incubate at 37oC for 30 min. Layer tubulin onto cushions of BRB80 containing 60% (v/v) glycerol the cushions shou ...

目的要求 1．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 2．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布基本原理酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。ACP在酸性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷酸钠 ...

细胞克隆，是将一个单细胞从细胞群中分离出来单独培养，使之重新繁衍成一个新的单一细胞群的培养技术。未经克隆化的细胞具有异质性，经过克隆得到的是均一细胞集团。这里仅介绍T细胞与NK 细胞的克隆方法。基本原理用限度稀释克隆形成法制备T 细胞克隆时，并非依赖细胞 的特性，而是将T 细胞在细胞培养板上稀释到统计学的浓度，即从理论值上达到每孔1 个细胞，其中加入IL－2 和PHA 可增强细胞的生长，而加入的同 ...

目的要求1.掌握血涂片的制备方法；2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；3.掌握显微测微尺的使用方法。实验原理涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。实验用品1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。2.试剂:Wright’s染液：Wright’s色素粉末 ...

文喻玲，赵庆欢，于 洋，陈元鼎［摘要］ 纯化是研究病毒理化特性、生物学和免疫学特性的重要步骤和要求。在纯化病毒的方法中，氯化铯（CsCl）密度梯度离心法是较为常用的方法之一，方法简便易行，获得的病毒样品较纯。本文报道一种轮状病毒(RV)的CsCl密度梯度离心纯化方法，在离心前用聚乙二醇（PEG 6000）浓缩得到的病毒增殖液中加入56％CsCl，使其成为均匀混合液，经水平转头密度梯度离心后，可以将 ...

目的要求通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。基本原理糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要 ...

一、实验目的1、进—步熟悉荧光显微镜的使用方法。2、初步了解几种常用的荧光染色方法。二、实验用品荧光显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、消毒牙签三、实验原理荧光法较一般光学方法具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点，因此近年来荧光组织化学特别是免疫荧光技术有了很大的发展。利用荧光技术可研究细胞内化学成分的分布与定位，研究细胞与组织中物质的吸收与转运，进行病理鉴别以及细胞免疫等方面的研究。 当用一 ...

一、实验目的：1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上 ...

① 学习坐骨神经干标本制备的一些基本操作技术。 ② 观察蛙类坐骨神经干动作电位的基本波形。 ③ 学习掌握神经动作电位传导速度的测定和计算方法。 ④ 观察神经组织兴奋性的周期性变化。 ⑤ 观察药物对动作电位的影响。 神经纤维的动作电位是神经兴奋的客观标志；神经干由很多兴奋性不同的神经纤维组成。神经干动作电位是由许多这种兴奋性不同的单根神经纤维的动作电位综合成的复合性电位变化。因 ...

基本原理NK 细胞克隆来源于NK 细胞，该细胞的分离方法参见第一节之四。这些NK 细胞与经γ射线照射的饲养细胞苓而获得的NK 细胞克隆。试剂和材料● 植物血凝素（PHA）母液为100μg/ml● 重组IL－2（rIL－2）母液为105u/ml，分装小瓶（0．5ml/瓶），置－20℃长期保存，或置4℃下短期存放。应避免反复冻融，IL－2 不能用滤器过滤除菌处理。● 培养基1.接种培 ...

一、实验目的 1. 初步掌握用差速离心法分离大鼠肝细胞线粒体的方法。 2. 学习并掌握高速离心机和匀浆器的使用方法。 二、实验原理 线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 制备线粒体时，可将组织匀浆液悬浮 ...

1、复苏细胞 1）液氮中取出所要的细胞，37℃水浴锅中快摇，勿让水入盖，同时将培养液放入37℃水浴锅中温育； 2）将细胞离心，同时进入超净台，无菌操作，将培养液瓶用卫生纸擦干，除菌后放入超净台，将盖子打开，瓶子放在架子上，瓶口朝火焰，将吹打吸管灭菌后吸部分培养液进入培养皿； 3）离心完毕，将细胞冻存液倾倒掉，吸入约1ml培养液到冻存管中，反复吹打，悬起细胞，吸入皿中，吹打，标好； 4) 显微镜下观 ...

一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene　5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesII）。2、冷冻保存方法：（1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时 ...

一、目的要求学习诱导植物器官外植体形成愈伤组织的方法。二、基本原理已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞，这个过程称为脱分化（dedifferentiation）。来自于植物各种器宫的外植体在离体培养条件下，细胞经脱分化等一系列过程，改变了它们原有的特性而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，即 ...

一、红细胞膜的制备(一)原理随着生物膜研究的迅速发展，在膜的结构及功能的研究中分离和鉴定生物膜常常是必要的。为进行膜结构的生物化学分析，必须首先分离出纯净的细胞膜。哺乳动物的红细胞膜在分离状态下。一般称为”血影”，其没有通常真核生物细胞内所含有的任何细胞器，经过制备，容易得到纯粹的细胞膜，并且在取材方面来源方便，因此哺乳动物的红细胞膜是研究细胞膜的好材料。从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜，第一步，将 ...

一、 实验目的 （1） 了解透射电子显微镜的主要结构、功能与基本工作原理； （2） 了解扫描电子显微镜的主要结构、性能与基本工作原理。 二、 实验步骤（讲解演示） 1）透射电镜样品超薄切片常规制作规程 1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3 2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时； 3．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min； 4． ...

一、实验目的　　1 了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。　　2 了解细胞中DNA和RNA的分布。二、反应原理1．Feulgen反应：　　DNA经弱酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff（无色品红亚硫酸溶液）试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应 ...

一、目的要求通过实验掌握诱导植物多倍体的方法和技术，观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞学表现。利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作出准确判断。二、基本原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。如玉米的体细胞具有20 条染色体，人类则具有46 条染色体，但是这些细胞核内的染色体并不是杂乱无序的，而是组成一个或多个染色体组（genome)，或称基因组。在同一染色体组内所有 ...

一、实验目的 　　掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。　　细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存， 再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架 ...

动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过全世界的生产能力。动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时 ...