细胞学检查包括有细胞的涂片与染色技术,其来源先于组织切片技术,目前是较为常用的病理检查方法之一。它所运用的范围也很广泛,如女性生殖系统、食管、胃、肺、浆膜腔积液、泌尿管道、鼻咽部等部位的脱落癌细胞,以及胸、腹腔的肿块、淋巴结、乳腺、和其它组织器官的细胞学诊断。 标本采集注意事项:: 1、要在较为准确病变的部位采集病变标本。 2、标本应及时处理,固定。以防止细胞自溶腐败。 3、避免异物掺入标本,如 ...
在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中,多种基因或遗传变化,区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞,将有助于了解疾病发生的分子机制。因此,在下一代的分子分析方法将需要进入微观世界及自动化程度高。对某一特殊个体的切片进行遗传指纹图谱鉴定,将有助于诊断及指导治疗。 然而,即使是最经典、可靠的检测方法,也不可避免混杂多种状态细胞中DNA、RNA或蛋白质分子的干扰,因此,需要发展组 ...
通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。20世界60-70年代,就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来,由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增,以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善,动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细 ...
深层培养可分为:分批式、流加式、半连续式、连续式、连续式和灌注式五种。 一、分批式培养(batch culture) 是细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式,也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器,将细胞扩大培养后,一次性转入生物反应器内进行培养,在培养过程中其体积不变,不添加其它成分,待细胞增长和产物形成积累到适当的时间,一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。 该方式的特 ...
生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。 一、细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 (2) 染色 ...
(一)、透射电子显微镜1、基本原理在光学显微镜下无法看清小于0.2µm的细微结构,这些结构称为亚显微结构(submicroscopic structures)或超微结构(ultramicroscopic structures;ultrastructures)。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率。1932年Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微镜(transmis ...
实验十二 联会复合体的染色与观察Mose(1956) 最早在研究精喇姑精母细胞减数分裂前期的超微结构时发现联会复合体(synaptonemal complex S.C),1977年他又证明使用光学显微镜可以检查联会复合体。其后发展了许多适用于光学显微镜检查用的S.C染色法。依靠光学显微镜显示联会复合体的技术,不仅对于联会复合体的结构和功能的研究有用,而且在临床细胞遗传学中对染色体异常、遗传性疾病的 ...
实验十一 杂交瘤技术杂交瘤技术是1975年Kohler和Milstein用于制备单克隆抗体而创建的一项重要技术,被誉为“免疫学上的一次革命”。此技术被广泛用于各种单克隆抗体的制备。抗体是由B淋巴细胞分泌的,一个B淋巴细胞只能分泌一种抗体。把B淋巴细胞和骨髓细胞融合,即可形成在体外长期存活并分泌的杂交瘤细胞,如果把单个杂交瘤细胞克隆化,扩增传代,其分泌的抗体即为高度纯一的单克隆抗体。单克隆抗体具有高 ...
实验十 动物细胞微丝束的光学显微镜观察细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞胞质中错综复杂的纤维状网络结构,主要包括微管(microtubule,MT,20~25 nm)和纤丝(filament)两大类;另外,胞质中还散布着一些3~6 nm的细小纤维。按纤维的直径、组成成分以及组装结构的不同,纤丝又可分为微丝(microfilament,MF)、中间丝(intermediate fila ...
实验九 腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法在机体的免疫过程中,巨噬细胞(MF)承担着噬菌、杀菌、清除机体内被损伤和衰老的细胞,以及传递抗原信息;MF将捕获的抗原进行加工处理后,把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。MF又是天然杀伤细胞(NK细胞)的激活剂,且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。实 验 目 的掌握巨噬细胞(MF)体外吞噬异物能力的测定方法,观察机体的非特异性免疫现象。实 验 原 理 ...
实验八 细胞凝集反应细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构,蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子,糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被(又称为糖萼)。许多研究结果表明:细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被(分枝状寡糖链)有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”,从而达到细胞凝集的效果。实 ...
实验七 叶绿体的分离与荧光观察叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器,光合作用就是在叶绿体中进行的 由于具有这一重要功能,所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,利用低速离心即可分离集中进行各种研究。实 验 目 的1. 通过植物细胞叶绿体的分离 了解细胞器分离的一般原理和方法。2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光 并熟悉荧光显微镜的使用方 ...
实验六 线粒体和液泡系的超活染色与观察活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法,其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体内活体染色是以胶体 ...
实验五 PEG介导的动物细胞融合技术 细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)是指真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。人工的细胞融合开始于20世纪50年代 60年代到70代作为一门新兴的技术 发展非常快 应用范围也极为广泛 除了同种类细胞间可以融合 种间远缘细胞也能融合 细胞与组织不同 不排斥异类、异种细胞 动物细胞如此 ...
实验四 染色体G-带的分带技术60年代以来,染色体分带技术有了突飞猛进的发展,特别是1970年以来,许多人类染色体分带技术的出现在细胞遗传学的科学研究中开创了一个新的时期。染色体分带技术可使我们准确无误地识别每一条染色体,使人们准确的认识每一个染色体和它们所发生的畸变,这就为染色体遗传疾病的诊断、杂种细胞检定,特殊细胞株的标记、染色体的识别等开创了一种新的方法,有助于染色体研究的发展,在临床上有着 ...
实验三 染色体的标本制作及其组型实验长期以来,在真核生物中 染色体的数量和形态具有物种的特异性一直可以作为此物种分类的基本依据之一。染色体作为遗传物质-DNA的载体 对生物的遗传、变异、进化和个体发生 以及细胞的增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。每一个物种的细胞一般都有一定数目、形状和大小的染色体。将体细胞核中全部染色体按照其大小、着丝粒位置,以至带型有序地排列起来,此模式图象排列即 ...
实验二 孚尔根反应(Feulgen Reaction)Feulgen反应(Feulgen reaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应,为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明,简称为Feulgen法。因对DNA的显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。实 验 目 的1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法2. 对细胞的免疫组化研究方 ...
实验一 透射电子显微镜的原理与演示 解剖、观察和分析历来是生物学研究的基本手段。用于细胞解剖观察的主要工具就是显微镜,它是我们观察细胞形态最常用的工具。但其分辨率的最小数值不会小于0.2mm(紫外光显微镜的分辨率也只能达到0.1mm) 这一数值是光学显微镜分辨率的极限。限制显微镜分辨率的关键因素是光的波长(光的衍射效应),显微镜无论制作得如何精密都无法突破这一极限 一般显微镜设计的最大放大倍数为1 ...
一、相关基础知识 生物体的一切生命活动,都是以细胞作为基本结构和功能单位来进行的。由于其内在结构和自身表面张力以及外部机械压力,细胞表现具有不同的形态,有圆球形、圆盘形、肾形、多边形、纺锤形等。更重要的是,细胞的形态与其功能密切相关,如红细胞是圆盘形的,有利于其在血管内流动及气体交换;肌细胞按收缩方向是细长的纤维状结构,适于细胞的收缩运动。精子细胞核小,具有一条能运动的尾或鞭毛,以利于其受精 ...
一、目的 学习生殖细胞的取材和染色体制片,认识减数分裂各时期的形态特征。二、原理生物秀细胞实验论坛交流 减数分裂是形成生殖细胞的一种特殊方式的细胞分裂。它是遗传学中一个特别重要的事件,是维持大多数动植物品种染色体数目世代稳定传递的根本机制。同时,基因的分离、自由组合以及交换无不是通过减数分裂发生的。可以说减数分裂是经典遗传学的根本,动植物都是通过减数分裂形成配子,所以减数分裂通常以植 ...