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相关专题 Northern Blotting技术专题 五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制(试剂盒提供)： 10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5m ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A.质粒DNA的小量提取 试剂及其配制 含AP的LB液体培养基 TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0) 1mmol/L EDTA (pH 8.0) 溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0) 10mmol/L EDTA 50mmol/L 葡萄糖 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板，其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子，同时，为了获得理想的Northern杂交试验结果，载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体，以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有：pGEM-3/pG ...

相关专题 二、RNA质量检测 提取的RNA需要对其质量和数量进行检测。实验室常用的方法有紫外吸收值检测和电泳检测两种。 方法一、紫外吸收检测 试剂：TE ( 10mmol/L Tris 1mmol/LEDTA)。 dH2O 试验程序 1.预热紫外分光光度计10～20min.。 2.取两个1ml的狭缝石英杯，一个装入1mlTE溶液作为空白校正 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 方法一、改良异硫氰酸胍提取法 试剂及其配制 异硫氰酸胍变性液： 贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理) 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备 ...

相关专题 探针的原理及其应用Northern Blotting技术专题 Northern 杂交是RNA定量测定的一种检测方法，主要利用碱基配对原则，利用特性的DNA探针与其杂交，经过显影技术分析RNA的量和大小。 Northern 杂交的原理 Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 1.制胶：(1%) 琼脂糖 2.5g 10×Mops缓冲液 25.0ml H2O 192.0ml 2.在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。 3.取出胶冷却到60℃，于通风柜中加45ml甲醛，混匀。 4.加20μl溴化乙锭，混匀。 5.令胶液再冷却10分钟。 6.将其倒入四面封好的 ...

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相关专题 Northern Blotting技术专题 Abstract: This is the standard and complete Northern blotting protocol including preparation of RNA gel RNA sample and probe hybridization detec ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 Prepare glass plates for gel:  Rinse plates with cold water then clean with dishwashing liquid and warm water. Do not scratch plates. Rinse with ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 (original protocol by R. M. Fourney S. Miyakoshi R. S. Day III and M. C. Peterson (Focus 10:1) modifications of this protocol were carried out by ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 by Michael Koelle and Tory Herman adapted from Sambrook et al. "Molecular Cloning" We found that both formaldehyde and glyoxal gels work very wel ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 RNA isolation Harvest Cells when they are about 80-85% confluent. Stationary phase cells have decreased RNA yield. Wash cells with warm PBS and s ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 1）硝酸纤维素膜或尼龙膜上的组织印迹1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层尼龙膜。2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或先用蒸馏水洗涤几秒钟然后再用Kimwip ...

相关专题 在western blotting 方面，本文绝对是一个新手，目前正准备磷酸化蛋白的Western，急需这方面的实验技术操作步骤和一些注意事项的指导。在网络上搜集整理了一个western blot实验达人的建议，供大家参考。 我做了很久的western blot，尤其是phospho-抗体，可以算是达人了。我根据自己的经验，对磷酸 ...

相关专题 Western是利用抗体检测蛋白常用的方法，本手册旨在表明Western-blot的技术原理、操作步骤及常见问题分析，可采用以下步骤进行Western-blot实验： Western-blot技术原理： Western Blot技术是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相 ...

相关专题 本期主题为“水稻基因组DNA的 Southern杂交与非放射性ECL直接核酸标记及检测”，主要是满足初学者对Southern杂交的了解。 Southern杂交的新手们不妨参考下。 【实验目的】 通过本实验学习和掌握Southern转膜、辣根过氧化物酶直接标记探针、Southern杂交及增强化学发光(ECL)检测分子杂交结果的过程。 ...

相关专题 Southern blot是分子杂交常用的技术，对于小编来说这可是浩大的工程，合理有序的实验安排是非常有必要滴。否则，一不小心，几天的心血的以下是搜集的有关Southern blot 实验安排，供参考。 Southern blot 实验安排酶切及转膜：第一天晚上：酶切过夜第二天：跑电泳，看酶切效果。50V，6小时。转移过夜。同时准备 ...

相关专题 本文主要介绍了Northern印迹杂交(Northern blotting)实验的原理、器材和具体方法步骤。Northern blotting是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 Northern blotting 1.原理 Northern印迹杂交(Northern blotting)将RNA从琼脂糖凝 ...

相关专题 本文详细介绍western-blotting的实验方法步骤，主要包括了配胶、样品处理、电泳、转膜、封闭及杂交、发光鉴定、增强敏感性、NC膜的多次使用等7个方面的内容。 western-blotting 一、配胶 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面乡下倾斜置于干净的纸巾晾干。 分离胶及浓缩胶均可事先 ...