western-blot

现在 lncRNA 研究已成热点，每天都有很多的lncRNA被发现。今天我们介绍一款在线数据库：网站链接：http://annolnc.cbi.pku.edu.cn/这个数据库界面特别简洁，小编第一看到他就如获至宝：简单明了不矫情。尤其适合英语 low low 的小编。只要找到你研究的那条 lncRNA 序列就好啦。下面看看它的功能随便找一个 lncRNA：NR_002578.2就他了！查询 lncRNA 序列：复制-粘贴到 Annolnc 主页面的文本框里：GO！不错 ...

是不是做 Western 的时候，会遇到这样的情况呢？没错，就是背景很脏。造成背景脏的原因有很多，比如一抗没洗干净，或者二抗没洗干净，还有就是封闭的时候不完全。但其实，封闭液也是你们很容易忽略的一个环境哈。封闭液有几种？除了脱脂奶粉和 BSA 还有啥你们能想到的？第一种封闭液就是脱脂奶粉，这是异常便宜的封闭液品种，当然也应该是你们最常用的封闭液配方了。（甚至我们用过特仑苏）但是，你们应该注意到的是，脱脂奶粉中有大量的生物素，也就是说 ...

1、裂解物制备每道全细胞提取物的 20–30 µg 总蛋白，通常足够用来检测。如果靶标蛋白的基础水平，或蛋白质修饰程度低，可能需要通过化学刺激剂来诱导表达或修饰。你可能要调查备选细胞系或组织，其所含的目的蛋白含量更高。应将样品溶解于适当的缓冲液中，该缓冲液包含蛋白酶抑制剂和针对磷酸化目标的磷酸酶抑制剂。应务必对裂解物进行超声处理，以确保有效的染色质和膜结合靶标的蛋白质提取。请查看我们网站上的对照物表，获得推荐的阳性对照物和 ...

蛋白质印迹流程点击下载：蛋白质印迹实验方案溶液和试剂裂解缓冲液这些缓冲液可在 4 ℃ 下保存数周，或者以分装形式在 -20 ℃ 下保存长达 1 年。Nonidet-P40 (NP40) 缓冲液150 mM NaCl1.0% NP40（可用 0.1% Triton X-100 替代）50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂RIPA 缓冲液（放射免疫沉淀试验缓冲液）150 mM NaCl1.0% NP-40 或 0.1% Triton X-1000.5% 脱氧胆酸钠0.1% SDS（十二烷基硫酸钠）50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂T ...

实验室玄学千千万，预测和结果不符占一半。WB 实验是各位艾粉们，时常光顾的一个实验。但就是这样一个初级又常用的实验，却会出现各种稀奇古怪的问题。比如在 WB 实验鉴定蛋白时，我们得到的蛋白质条带大小常常会和预测值有所偏差。这是身患「强迫症」的艾粉们不能忍的。如果是实验出错或者预测不准这种情况，小艾是没办法跳出手机屏幕救你了。但这下面的 5 条准则，艾粉们倒是可以珍藏一下，在遇到蛋白质条带大小和预测值偏差的时候，拿出来分析一下。我们可 ...

今天组会后师妹很不开心，因为老板看了她的 western blot 的结果图后一脸严肃的说：你这个差异不明显啊。师妹说怎么就差异不明显了，我觉得挺明显的啊，她凑近电脑屏幕看了看后，又后仰身体拉大了距离进行观察，就差拿尺子来测量条带的长宽了。我被我这可爱的师妹给萌化了，但又不忍心看她愁眉苦脸的样子，于是轻抚摸师妹的秀发，深情的说到：妹妹，给你安利一款软件，轻松搞定 WB 结果表达差异。好了，下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果 ...

刚接触 Western Blot 不久的用户，在选购 WB 设备时，经常会遇到仪器选型的问题：为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择，干式和湿式，那么哪种方法更适合我们呢？这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。我们一般会优先推荐大家选购 YRDIMES 快速半干转印系统，因为干式转印速度很快（常规转膜 30-60min，快速转膜 7-10min），操作也简单，并且 YRDIMES 快速半干转膜系统性 ...

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时，磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分，处理不得当时，还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多，比如封闭问题，抗体问题，或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。然而，有一个常被大家忽视的重要原因就是蛋白样品制备所用的方法是否适合于磷酸化蛋白的提取？其实蛋白质提 ...

这篇综述重点说明使用RIPA裂解液提取总蛋白以及下游实验中可能存在的问题。RIPA裂解液常用于从脊椎动物细胞和组织中提取总蛋白。但是由于蛋白质间有较大的差异和非蛋白成份的干扰，所以从一个样本中同时释放和溶解所有蛋白质是非常困难的。特别是一些整合到膜上的蛋白质，或与其他蛋白质/核酸形成复合物时，就大大阻碍了提取效率。因此可以推断，蛋白质在提取过程中或多或少的与在体内时真实情况不尽相同。经典RIPA裂解液中含有 ...

Western Blot转膜之前免不了要在蛋白质垂直电泳槽中跑胶分离蛋白质。关于制胶，大多数用户还是喜欢用电泳槽配套的制胶器来自己制胶跑电泳，经济实惠。但是很多实验室因为设备已经使用多年，常会发现垂直电泳槽的制胶器没有原来好用了，经常会有“漏胶”或者“漏液”的现象，也就是说，凝胶溶液还没有来得及凝固，就从玻璃板某个周围的某个缝隙“漏”出去了。最糟糕的情况莫过于，漏液速度没那么快，刚加好溶液时看不出来有漏胶或者漏液，而等 ...

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与 So ...

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：一抗浓度对实验结果的影响抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)样本：人 HeLa 细胞 (Fig.1)A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 ...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。深圳子科生物技术部主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术：一、 原理与 Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二 ...

在 WB 和 IP 实验中，破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织（如脑组织），在准备 WB 或 IP 的样品时，紧密的纤维组织（如肌肉组织）需要更剧烈的方法；对于培养的原代细胞或细胞系，在准备 WB 和 IP 的样品时需要一定的机械搅拌去提取蛋白。机械破碎样品常规的方法和设备如下：组织高速匀浆仪通常破碎体积大的植物或者动物组织需要用可旋转、带有刀片的匀浆仪或者搅拌器 .这些仪器通常通过一个电动的马达带动不锈钢可旋转切割刀片，可以从顶部或者 ...

Preparation of Protein Extract1. Prepare extracts from cultured cells or tissues with our Trident Extraction Kits.The total number of cells per ml and the cell equivalent loaded per lane of gel should be optimized specifically for each protein and antibody.2. Determine the protein concen ...

自噬是一种动态的、分解代谢过程。该过程中，溶酶体自我吞噬的方式对细胞组分进行分解回收。在酵母菌和哺乳动物细胞中，目前已识别的许多吞噬基因都与线虫门的秀丽隐杆线虫同源。近些年来，由 RNA 干扰（RNAi）和染色体突变导致的基因失活，早已被用来识别秀丽隐杆线虫的自噬功能，同时子啊多个生命过程中，自噬也表现出其所起到的重要作用。比如，对压力、寿命、细胞凋亡、细胞生长控制、易聚合蛋白的清除、胚胎发育过程中 P 颗粒的退化以及、细胞凋亡清除 ...

Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。为利于更好的实验效果，不同蛋白，转膜条件略有不同，迪申生物技术（上海）有限公司专注于生产免疫组化相关产品多年，对 WB 实验有一定了解，今天跟各位同学一起分享下实验过程中发现的不同蛋白的转膜条件。蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称：一些转录因 ...

Western 免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。WB 实验中常会出现各种问题，迪申生物技术（上海）有限公司专注于生产免疫组化相关产品多年，对 WB 实验有一定了解，今天跟各位同学一起分享下 WB 实验中各种问题及应用对策。问题可能原因建议电泳条带成笑脸状胶不均匀冷切，中间冷却不好，电泳系统温度偏高减少电 ...

若目的条带未出现，或很淡，可试用以下方法增强发光强度：1．用清水漂洗膜数分钟，重加发光液进行曝光，可延长曝光时间；2．将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长，期间至少换 2 次液；3．封闭 40~60 min；4．一抗杂交，室温 1 h。37℃ 1 h 会更强，但可能增加非特异条带；5．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；6．二抗杂交，37℃ 1 h；7．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；8．发光鉴定；9．若条带仍未出现或很淡，可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min，期间换 2 次液；10．三抗杂交 ...

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。1．HRP-ECL 发光法：将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1-2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定 Marker，进行 ...