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        操作篇:western blot 之增强敏感性

        互联网

        7129

        若目的条带未出现,或很淡,可试用以下方法增强发光强度:

        1.用清水漂洗膜数分钟,重加发光液进行曝光,可延长曝光时间;

        2.将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长,期间至少换 2 次液;

        3.封闭 40~60 min;

        4.一抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带;

        5.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;

        6.二抗杂交,37℃ 1 h;

        7.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;

        8.发光鉴定;

        9.若条带仍未出现或很淡,可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;

        10.三抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带。三抗即抗二抗的二抗,比如二抗用羊抗兔,此时三抗可以选择兔抗羊或鼠抗羊等;

        11.PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;

        12.发光鉴定。

        注:一抗溶液中加入0.2% 叠氮钠后,可4℃存放至少 2 周,存放一个月我也用过,没问题,再长时间还没试过。
         

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        生物学霸订阅号:shengwuxueba

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