蛋白分离纯化

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过 60% 的药物靶点，占细胞总蛋白的 20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。 使用表面活性剂进行质膜蛋白分离有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白 IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面活性剂的方法分离质膜蛋白 ...

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白极具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法：A.RIPA 缓冲液提取法：脂肪组织 ...

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白极具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法：A.RIPA 缓冲液提取法：脂肪组织 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过 60% 的药物靶点，占细胞总蛋白的 20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。 使用表面活性剂进行质膜蛋白分离有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白 IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面活性剂的方法分离质膜蛋白 ...

原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acrylamide简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，Nˊ-MethyleneBisacrylamide,简称Bis）,在催化剂核黄素或过硫酸铵和四甲基乙二胺的催化下，聚和而成的具有三维网状结构的胶。正常情况下蛋白的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。而在丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，则蛋白的迁移率主要取决于蛋白大小，与所带电荷与形 ...

破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时，人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然，也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机，发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。特别地，一些尤其坚硬/韧性比较强的样品，或要求维持低温条件进行破碎提取的样品，需要结合液氮进行研磨，如：皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等；使用普通机械研磨方法，很难既保证研磨破碎效果又保 ...

本帖姐妹篇：【原创】蛋白质纯化武器－设备篇（欢迎补充）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=3&keywords=%B4%BF%BB%AF%CE%E4%C6%F7（这篇小文可是上过丁香园的头版哦，还曾给配了个好看的图片，感谢）【资源】蛋白质纯化武器－资料篇（欢迎补充）http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17703087条条大路通罗马，纯化之路千万 ...

发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology标　题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（一）发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST本文献给YL引子　2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的 ...

聚乙二醇具有较广的分子量分布，随着平均分子量的不同，性质也产生差异，当分子量小于1000Da时，聚乙二醇是无色无臭粘稠的液体，高分子量的聚乙二醇则是蜡状白色固体，固体聚乙二醇的熔点正比于分子量，逐渐接近67℃的极限。毒性随分子量的增加而减少，小于400Da的 PEG在体内会经乙醇脱氢酶降解成有毒的代谢物，而分子量大于1000 Da的PEG经过多年应用于食品业、化妆品业和制药业证明没有毒性。聚乙二醇分子中含有大量乙氧基， ...

一直以来，园子里一直有很多战友在关于包涵体蛋白的纯化以及透析复性这块存在很多疑问。我从事包涵体蛋白的纯化以及复性这块的时间比较长，有一些经验，希望能与大家一起分享、讨论。大家有什么问题和经验也可以提出来，共同探讨一下。我先把园子里关于包涵体纯化和蛋白复性这块非常有价值的帖子整理出来供广大战友参考。包涵体纯化与复性：色谱柱纯化包涵体包涵体纯化的方法与肝素有亲合力的包涵体的纯化包涵体纯化复性的一篇文章HIS包涵 ...

本篇虽然是《蛋白质纯化武器》系列中的第三篇，但它属于全体战友，属于伟大的互联网。系列前两篇分别为：蛋白质纯化武器－设备篇http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=1&tpg=1&age=-1蛋白质纯化武器－工艺篇http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15298689&sty=1&tpg=1&age=-1与前两篇为本 ...

工欲善其事，必先利其器。对照一下，你的实验室还缺那些？（1）超声波细胞破碎机适用于5－100g湿菌体超声破碎，实验室规模用。一般可选择直径10、15、20mm的超声探头。推荐国产机器为宁波新芝。（2）高压匀浆机大规模生产用，对菌体量无限制。破菌效果好，但要注意冷却。（3）高分散乳化机均匀悬浮菌体用，比搅拌快，均匀性好，特别适合于大规模生产。另外，大规模生产时缓冲液的配制很有用，可快速溶解、混匀。推荐品牌：IKA 国产品牌：FLUKO ...

以下是蛋白论坛关于层析纯化蛋白的大部分有一定深度的帖子（其中大多数讨论对于接触蛋白纯化的新手及做纯化工作的同仁来说都有积极意义），包括亲和层析、疏水层析、离子交换等几个系列，罗列主题多有概括以方便大家寻找。此项工作将一直进行下去直至版块有新的安排为止。层析纯化蛋白讨论集成之一(亲和层析)关于亲和层析的纯度问题CNBr-Sepharose 4B 的再生离子交换层析与亲和层析 离子交换?亲和层析?亲和层析间隔手臂分子的选择关 ...

下游纯化工艺简介Downstream（下游）与上游相对的概念，一般而言，上游指基因克隆、细胞培养等目的产物表达工序，下游指从表达有目的产物的复杂的混合液中分离纯化得到符合要求的目的产物的一系列步骤。美、日、欧等发达国家生物技术产品工业化的实践证明：生物技术产品的产业化高度依赖于基因工程下游工序技术及设备的进步。一、纯化工艺常用衔接技术：1、盐析。常采用硫酸铵、硫酸钠盐析，获得的盐析沉淀物在低温冰箱(

蛋白质提取与纯化技术　　选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的 ...

争做“超离达人” 有奖活动超速离心机是实验室常见的分离纯化工具，密度梯度离心是利用超速离心机分离纯化生物小分子的常用方法，如蛋白、病毒、核糖体、线粒体……现在，您是怎样制备密度梯度液？您是怎样收集样品条带？手工吗？北京五洲东方公司的全自动密度梯度制备和分离系统，能够1min内快速制备6管线性密度梯度，无扰动无层流精确分离样品组分条带，实现密度梯度离心全自动化。带着这个问题，让我们走进“超离达人”有奖活动！本期活动邀请丁香 ...

选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于 ...

我收集了些资料，希望大家喜欢与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小，形状，溶解度，等电点，亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。与此相对应的分离纯化方法参见表1。从表1可看出，当前蛋白质的纯化主要是依靠层析和电泳技术。由于重组蛋白在组织和细胞中仍以复杂混合物的形式存在，因此到目前为止还没有一个单独或一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来，而 ...

膜蛋白的种类繁多，约占总蛋白的30%，同时赋予细胞膜非常重要的生物学功能，但是由于其特殊的性质和结构特点，我们获得膜蛋白相比较其他蛋白来说要困难得多，因此如何获得大量有生物学活性的质膜蛋白对我们显得非常的重要，本人曾经试图获得一肿瘤组织中的p-gp,也许是由于实验室条件的限制，费了九牛二虎之力也未能获得一个比较理想的结果，如果大家有什么好的分离膜蛋白的经验不妨贴出来，供大家一起分享，共同学习，共同进步。以下是我 ...

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂一、菌体的裂解1、怎样裂解细菌？细胞的破碎方法1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2.玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再 ...