蛋白表达

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！woxingwosu 呵呵，你的confocal照的效果很不好呀。不过确实可以看到其定位主要 ...

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！kern6549 会不会是该受体带上了EGFP后无法定位到膜上了。rebeccagold 谢谢 ...

tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列 ...

zhubest 我正在克隆一个八百多bp的基因，换了很多载体，表达条件换了不少，可始终不能得到可溶的蛋白表达，哪位大师能够支招，可以提供一些表达条件，谢谢了freecell 可以尝试真核表达系统，例如杆状病毒系统或者毕赤酵母。vbvbvbfgiw 先得确定连接转化都成功了吧，换一种裂解细胞的方法试试（溶剂），使你的蛋白溶解。版主freecell留言:您误解楼主的意思了。zhubest 谢谢版主啦，不明白为什么包涵体始终不能通过变 ...

月下独见 哪位高手知道蛋白质入核抑制剂有哪些？？哪个公司有卖的？zhujoker 我不是很清楚你问题的来源，但是有一点你要清楚，没有一个试剂能够抑制所有蛋白质的入核，所以你问问题事最好说清楚一点月下独见 目前我正在研究一个基因，它表达的蛋白是要入核起作用，老板让我去找抑制这个蛋白进入细胞核的试剂（当时老板说的是核质穿梭抑制剂），可是我找了很久都没找到。老板说原来有师姐用过，可是我去问过那个师姐用的是出核转运抑制剂Lept ...

wulingjie2008 (重复发贴，请版主见谅！)各位老师你们好！我是一名刚踏入研三的小硕，做了一年的基础实验，现在实验结果都出来了；但在分析时发现，所做的三个细胞因子中，有两个细胞因子的转录水平与其蛋白表达水平不一致；也就是说某组病人的细胞因子转录水平明显低于其他各组,且该转录水平与临床资料相关；但其蛋白表达水平却是高于其他组别，而与临床资料无相关性；对于这样的情况，我该如何解释实验结果？望请各位老师给予指点， ...

hxf_86 各位大侠，小弟请教一个问题哈～现在想寻求一方法，特异性的阻断细胞内一个蛋白（暂且叫这个蛋白叫B）的作用。以下是一些背景：1.蛋白B是从一个大蛋白（暂且叫作蛋白A）中水解下来的2.B从A中水解下来是自然现象，水解下来以后呢，A和B都有活性的3.现在想特异性的阻断B的活性，但是要求是不影响A的活性，所以不能用RNAi4.如果是用抗体的话，请问抗体能进入细胞核吗？谢谢各位大侠啦～hxf_86 哪位大侠能给予我帮助啊～有 ...

lishuning2010 我的实验中，Western blot显示蛋白水平随时间延长表达增加，但是RT-PCR结果却显示随时间表达减少，如何解释？zhujoker 那看一下是不是蛋白降解减少？bigbang_0_0 有可能蛋白质的稳定性增加或者翻译效率增加，增加幅度大于mRNA降低所带来的蛋白理论水平降低的幅度lishuning2010 非常感谢给予支持，请问有没有相应的文献给楼上的解释支持呢？比如也有蛋白和基因结果不一致，使 ...

lnu2005 请问个位达人，有谁用过这种载体，在表达蛋白的前面有GSSGSSG 末端有SGPSSGfreecell 我把“GSSGSSG”放进google.com里面，第二个结果就是。自己为何不尝试先动手搜索一下呢？lastone9853 版主说的对～本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

ydh790214 请问有小鼠的组织特异性表达查询工具吗？多谢！freecell http://www.informatics.jax.org/expression.shtmlhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2438328/ydh790214 freecell wrote:http://www.informatics.jax.org/expression.shtmlhttp://www.nc ...

myskite 查一蛋白在不同器官组织的表达，用什么网站？slytjiaofei 看看这个是不是有帮助！！！http://bioinfo.wilmer.jhu.edu/tiger/ydh790214 请问有小鼠的组织特异性表达查询工具吗？多谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

伽利略 我一直都不太明白，请达人解释下，谢谢bigbang_0_0 蛋白质功能上的变化包括质变和量变两种，所以要检测总的p32蛋白水平。George2 测总P38是为了了解P38的表达背景，以估测激活的P38占总量的比例。伽利略 我是这样想的，请问有何问题P38磷酸化水平若增高不论是否P38总量变化，都能说明P38活跃或者激活，不测P38总量也可以。我看到不少刊物测试某些蛋白功能变化时只测了磷酸化水平，而未曾测该蛋白总量。侠骨 ...

月亮欣 AFP甲胎蛋白的受体作用机理以及如何证明体内存在其受体最近复习时，遇到的一个历年考题，请各位高手帮助解答，万分感谢！月亮欣 自己顶啊月亮欣 没有人帮忙啊，有专家吗，恳请解答！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

ellen_hu 作为这方面的白痴，实在一团雾水，有没有高手指点一二，把其中的一般流程讲述一下，是我能够形成一个整体的印象，谢谢！！！！！急切！！！chenlinjie686 上nature或者annualreview 查GRK的综述文献...chenlinjie686 丝氨酸苏氨酸的点突变咯本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

linghe82 为什么蛋白在肿瘤里有表达而在肿瘤细胞中却检测不到?freecell “在肿瘤里有表达”是什么概念？是怎样检测到的？linghe82 We have screened a large number of human ovarian cancer cell lines for expression of MUC4. Our recent study showed that MUC4 is expressed in above 95% of ovarian tumours (Chauhan et al,2006); however, it was ...

yulanxin 最近在做荧光素酶双报告系统的实验，结果发现，用pcDNA3.1 overexpression我的目的蛋白后，随着目的蛋白剂量的增加，luciferase和Rellina的荧光值都有提高。由于该目的蛋白和许多mRNA的相关蛋白均有关系，因此我们推测该蛋白可能稳定了报告基因mRNA的寿命，导致其翻译水平的增加。但是，也有可能它是在转录水平促进了启动子的非特异性转录导致报告基因的mRNA水平增加，因此，想 ...

kimmileecn 我现在在做有E-cadherin的课题，其中要涉及使E-cadherin不表达，请问除了RNAi，还有其他方法吗？谢谢iscience 教材上没有。本人总结的文献上的方法有：1、构建突变体 ，单点或者多点突变，使之缺失；2、使用特异性抑制剂；3、使用该蛋白的特异性单抗或者多抗，封闭该蛋白的作用；4、使用与该蛋白性质相近的分子，使之与该蛋白竞争性发挥作用；...zhyu8221 lz肯定是在动物或者细胞水平，除了干 ...

attenuator 有一个问题一直没有查出相关资料或信息。就是：β globin 蛋白在血液组织之外的细胞有没有表达，能不能RT检测出transcripts或western检测出protein。为了这个去重复实验，条件不允许，但前人肯定有做过的，教科书里没有介绍，只介绍了时间特异性（胚胎到成体），没有介绍组织特异性——除了造血组织（或成红祖细胞）之外，在其他组织里，β globin是不是就沉默了，它那一簇基因是不是从它LCR开始 ...

bst5 用pCDNA3.1-HIS载体做的重组，切去了一段含有终止密码子的片段，但下游仍有一个终止密码子，想请教一下是否影响目的蛋白的表达吗？sunyong_97 如果还有一个终止密码子，那么到那个位置肯定要终止的啊bst5 可是终止密码子在我目的蛋白的下游啊，谢谢你的回复sunyong_97 bst5 wrote:可是终止密码子在我目的蛋白的下游啊，谢谢你的回复这样的话，你的目的蛋白表达出来以后再终止。本文由丁香园论坛提供，想 ...

【嘉美生物】北京嘉美生物就eBioscience公司的产品 （#00-5523 Foxp3 staining buffer set使用方法，也适用于胞浆和核内抗原的同时检测）浅谈流式核内蛋白染色步骤：1、染表面抗体按说明书条件孵育全血样品孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素（按厂家说明操作）溶血完毕。2、用2ml预冷流式染色缓冲液（Flow Cytometry Staining Buffer）洗涤细胞300-400g离心5分钟，去上清。3、用3倍体 ...