其他PCR技术

查了一些发现在本版还是有一些免疫组化方面的求助的，而其他版又没有旧帖整理这个分版，所以发在这里，望主任理解。1。免疫组化的原理http://www.dxy.cn/bbs/thread/856955http://www.dxy.cn/bbs/thread/1008921http://www.dxy.cn/bbs/thread/10119982。免疫组化的步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1045385http: ...

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...

基本PCR引物设计参数引物设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。特异性是指发生错误引发的频率。特异性不好或劣等的引物会产生额外无关和不想要的PCR扩增子，在EB染色的琼脂糖凝胶上可见到；引物效率是指在每一PCR循环中一对引物扩增的产物与理论上成倍增长量的接近程度。①引物长度；特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值（引物/模板双链体的解链温度）几度的范围 ...

:(我需要扩增一段长约700bp的启动子区域，做过梯度，但每次跑出来的条带很浅，而且会随着电泳时间的增加逐渐变淡，同时，引物二聚体一直很明亮。后来做了阴性对照，竟然也出现一样的条带。我们怀疑是受了污染，但也说和引物有关。:?):?):?)所以在此求教各位帮忙提点参考意见。1 gtgcagtggc tcaatctcgg ctcactgcaa gctccgcctc ccaggttcat gccattctcc61 tgcctcagcc tacatagtag ...

jiangjun82313 wrote:发表一点不同看法:1. 相对定量还是有相当市场的, 大家看文献即可知道.2. 相对定量(2-2deltCt法)需要验证扩增效率, 且扩增效率接近100%. 在你提到的哪篇文章里有: (1+E)-△△CT, 2 -△△CT是当二者的扩增效率接近1时才能得到.3. 选择一个组织的检验扩增效率就可以, 因为扩增效率主要与PCR条件有关.4. 是每个组织都要做三个重复,然后取平均值,然后再在一组小鼠的相同组织中取平均值和内参基因相减. 可以分开 ...

OLIGO 是一个从序列文件中搜索和选择寡核苷酸的多功能程序，应用于聚合酶链反应(PCR),DNA测序，定点突变及各种各样的杂交研究。OLIGO根据最近邻热力学值计算寡核苷酸的杂交温度和二级结构。 这个好工具也用于构建合成基因，在已合成的基因中发现适当的序列引物，发现和多元化一致的引物和探针， 甚至发现蛋白质潜在的限制位点。OlIGO 产品特色：1. 分析TM和内部稳定性，绘制溶解温度图和稳定性图；2. 给出寡核苷酸的重要相关信息；3. 显示 ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq 敢种 剂，③模板中蛋白质?有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现 ...

聚合酶链反应的历史回顾聚合酶链反应相关技术的发展其它体外核酸扩增技术PCR技术的应用举例一、聚合酶链反应的历史回顾1、核酸体外扩增最早的设想　　由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时(1970年)Smith等发现了 DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khora ...

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)　 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。　PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰 ...

用的是反转录的CDNA为模板3‘RACE方法扩增一未知基因的全长利用已知序列设计上游引物 ，下游为试剂盒提供的Adaptor PRIMER扩增结果有杂带 但500bp左右目的条带很亮 纯化后测序结果是另一基因与我已知序列BLAST 2 SEQUENCE 并无相似性 ？？？？？到底是怎么回事啊？？？引物同源性在BLAST比对的结果怎么分析 看不大懂 都是100％一致的上游CGGTGAGAAGTTCCGTTATG3’Adaptor primer ctgatc ...

增加PCR特异性（一）引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点：1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错 ...

现有一段序列：CGGCTCTAAACTGTAAACCTCTAAGGGGTGTTATGGTATAACCCAGAGATTCTGCTAACTTTACATGTTCACTAAAGTATGTCCCCAGCCAAGTCCCAGTCGGATAGATCGTCTTCCCTTCATGTTTACATGGTAGGATAGGTGTTTGGAAATCTAGTGGACACTCAACTTTACACTCAACGTAACCGTAGAA ...

各位老师好，我是论坛新手，请多关照。本人在中华检验杂志写了一篇关于提高PCR阳性率方法的小文章。贴上，望大家指正、批评。提高乙型肝炎病毒P基因区聚合酶链反应检测阳性率的策略徐文胜 张瑞祺 缪晓辉 郝 勇 吴文雅目前许多抗乙型肝炎病毒药物是通过抑制HBV DNA多聚酶活性而达到抗病毒效果。然而病毒在药物选择压力下会发生基因突变，而获得对药物的抗性。测序是判断病毒碱基突变最直接和最可靠的方法，但在作序列分析之前必须采用聚合酶链反应（PC ...

lhailzhj主任在 2004-02-14 00:50已经整理了以往的内容：电泳问题这里主要是整理此日期以后的内容，不足之处还请lhailzhj主任和其他几位主任以及各位战友批评指正！如何回收电泳条带？DNA Marker准吗？sscp配胶的问题电泳用的MARKERS启用后如何保存关于PCR产物电泳的问题对溴乙锭用量的一点看法PCR结果目的条代弥散的原因EB有何危害有关小片段回收问题提RNA有较多的5s片段，问题出 ...

更多详情请登陆：http://www.biogm.ebigchina.com技 术 转 让（1） 高效Taq酶菌株：该菌株所含质粒源于pTAQ，TAQ基因经过几次点突变，扩增效率更高。制备简单质量稳定，扩增片段能达到8Kb。提供制备工艺（粗酶制备和精酶制备工艺两套protocol，以及质粒信息）。同时提供相关文献。（2） 制备T-Vector 的菌株，该菌株所含质粒由pGEM-T easy 改造而成，经XcmI 酶切后形成T-vector（与pGEM-T easy ...

支持版主工作，友情整理6月15日至8月17日的无人应助帖（不规范帖出外）。年代有点久远的帖子，请您回复时同时PM给求助者:)引用yaplewang战友的一句话：七、八月是应助的淡季，，，因此无人应助帖比较多哦，请大家积极应助！【求助】速求引物序列外文文献作者：lotus115====================【求助】关于MSP（新手急求助!!)作者：pheonix_1314====================【求助】关于TAIL——PCR的问题作者：西在东 ...

末代沙皇尼古拉二世、1918年的流行性感冒病毒、电影《侏罗纪公园》，以及辛普森杀妻案，这四件事情到底有什么相关？答案是没有。只不过近十几年来生物技术的一项新发明，把它们给连在一块了。这项技术就是“聚合酶链反应”（polymerase chain reaction，PCR）。PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁 ...

from sangon当PCR结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行：将PCR反应的试管与反应板紧贴。当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在0.2-ml的PCR管中不能均匀传热。不要随意减少dNTP的用量，它是一个系统的因素，必须与其它成份保持平衡。对于有问题的PCR反应，例如模板的量少，模板不纯和环状模板等，先尝试加Taq酶前的体系进行预变性，后加模板进行正常PCR扩增。 ...

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术便是一种具 ...

PCR技术及其在临床诊断应用中的进展　　　王保龙　　聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）技术自1989年开始被应用于临床检验以来，以其快速、简便、灵敏等优点很快地成为临床实验诊断学的一个技术热点。目前，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。PCR技术虽然作为一种新生的高新技术而代表临床实验诊断学发展的又一里程碑，但十多年的临床实践表明，传统的PCR技术本身还存在着一些问题， ...