其他PCR技术

核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是检测核酸蛋白质的重要工具。以下是说明书的内容。检 测 仪 使 用 说 明 书一．概述　 核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是液湘色谱仪中的一种紫外检测装置，核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是根据生命科学的发展对于现代色谱仪器的要求而改进设计的一种新型紫外检测仪。该仪器在创新方面的主要特点为：1. 该仪器除配有输出10ｍV记录仪信号外，还配有输出适合计算机积分仪的输口，这样很方便构成色谱工作站系统。（可同时进行计算机和记录仪信号输出，亦 ...

PCR问题的总结pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变 ...

进行一次成功的连接实验需要优化一系列实验指标。A）载体和插入片段的摩尔浓度比特别重要，载体：插入片段的摩尔数的变化范围可为8：1到1：16，但通常的变化范围是3：1到1：3。插入片段的长度和序列的变化会影响和同一载体的连接效果。每一个连接反应都需要作实验，来选择最佳的载体和插入片段的摩尔数比。在最小的反应体积中，通常一个连接反应用10-50ng的载体DNA。B）进行连接反应时的保温的时间和温度也需优化。一般而言，平 ...

PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10k ...

由那位老师作过醛固酮合酶的RT-PCR，我已经P了两个月了，还是为扩出来。我用Wistar 大鼠的心肌及肾上腺组织提取RNA并RT，后进行PCR，已经换了3个引物，其中由两对引物是文献（英文一篇）报道的，但还未P出来，PCR条件我都试了好多次了，同样的标本P其他的3对基因都很顺利，就这对出不来，郁闷死了！！如果出不来结果以前的试验就白做了。下面是我的一对引物及基因序列：请帮忙分析一下，尤其是作过醛固酮合酶CYP11b PC ...

贴出我的问题来晒晒，也很郁闷的一件事。相同方法提Ｃａｓｅ　＆　Ｃｏｎｔｒｏｌ两组ＤＮＡ，同时扩增片断A(易扩增)，问题Case组结果良好，而Control组没有结果；于是分别混出一支ｍｉｘ。Ｎａｎｏｄｒｏｐ测浓度：见二者结果相仿，就又把A扩了一遍。下图中2-7道为模扳上样梯度。鉴于Nanodrop的比值没有太大偏差，考虑control溶液中的其他未知杂质，采取酚-氯仿-异戊醇重新抽提、乙醇沉淀洗盐纯化，原体积1/2的ddH2 ...

大家好，Fluidigm BioMark 系统通过集成流体通路（Integrated Fluidic Circuit, IFC），将上万个微小管道、控制阀门集成到微板上，形成纳升（nL）量级的反应仓，不需特别移液器，就可以同时进行多达近万个常规qPCR (传统Taqman 或其他) 实验。操作简单，既有传统qPCR可定量之好处，又有基因芯片高通量耗材少之优点，能大幅提高实验效率及准确度。· 单个细胞基因表达( Single Cell Gene Expression): ...

关于PCR假阴性问题总结（建议大家看看）PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性却不同，它涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。就临床而言， ...

　　附件炎应怎样治疗?患上附件炎有什么危害?附件炎是指输卵管和卵巢的炎症，长期久坐、常穿紧身裤、不注意经期卫生都容易引发病菌感染而导致附件炎。下面专家对附件炎的危害及治疗方法进行了介绍，一起来了解下吧。　　得了附件炎怎么治疗?对于很多女性来说，附件炎是一种常见的妇科疾病，发病率也在不断增高，同时对人的身体有一定的伤害，需要引起女性朋友的重视。那么，得了附件炎怎么治疗?针对这个大多数人都很关心的问题，下面请北京艾丽斯妇科医院 ...

实时定量技术，是指在PCR体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，具有特异性强、自动化程度高等特点。因此已得到广泛应用。目前我们用的最多的就是SYBRGreenI（Molecular probes）和EvaGreenTM (BIOTIUM, USA) 这两种荧光染料。EvaGreen荧光染料与SYBRGr ...

RealTimePCR法是实时监测解析PCR扩增量的方法。因其无需电泳，大大减低了实验污染的机率，且具有快速、可对检测靶基因定量而倍受青睐。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞、细菌等mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。一、荧光定量技术服务需要的配套设备1、荧光定量PCR仪 ABI7900 ...

1.PCR芯片介绍实时定量PCR是检测基因表达最灵敏、最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化可反映出样品中的基因拷贝数，并且实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内参基因，因而每次实验只能检测少数几个基因的表达水平，若要检测大量基因，则工作量巨大，耗时长久。通过简单的以及经过优 ...

沙滩上美妙的一天？Corona Del Mar这个典型的南加州海滩上美好的一天：晴朗的天空万里无云，蔚蓝而清澈的海水泛起层层海浪拍打着白色的沙滩。两位老人漫步在沙滩上，小孩子在他们前面嬉戏追逐着海鸥。今天的海水看起来那么清澈，沙滩上也没有竖起鲜红的指示牌或者黄色的隔离带警告人们远离被关闭的海滩。这样的景象并非总能看到。由此往北行驶一个半小时，在南加州海岸的另一个著名的地点，这个邻近Malibu Pier的区域最近被自然 ...

PCR基本原理： PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构 成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结 合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降 ...

Mullis博士在发明PCR技术后曾这样描述：“用一个单分子DNA，PCR能在一个下午内产生100百万个相似的分子。反应很容易进行，只需要一个管子、一些简单的试剂和一个用来加热的设备”（Beginning with a single molecule of the genetic material DNA the PCR can generate 100 billio ...

对于PCR实验来说，如何在得到理想的扩增产物的前提下尽可能加快反应进度、缩短反应时间是每个PCR实验人员关心的热点。下面我就这一问题谈谈自己的看法，以便抛砖引玉。 PCR实验所耗的时间大体上可分为三个方面：模板制备、PCR加样与上机反应、反应后的电泳检测和拍照。 一．模板制备 对于模板制备阶段，尽量缩短模板提取时间既有利于缩短整个PCR反应时间又可以尽可能的减少模板降 ...

PCR仪器发展的趋势之一变得更加微型化， PCR芯片就是在这种趋势下诞生的。PCR芯片就是在微型的载体上进行PCR反应，是微型化的PCR仪。芯片PCR不仅节省了大量反应试剂因此降低了实验成本，还有助于提高反应速度。下面就让我们回顾下PCR芯片的发展历史： 早在1994年Peter Wilding等人就通过在硅表面蚀刻的三维小室放入PCR反应物，然后通过半导体加热制冷片控制温度，扩增 ...

一、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采。 取预防措施： 1. PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 2. 组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。 3. 用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序 ...

一、总RNA的提取 总RNA的提取方法多种多样，目前常用的酸性异硫胍一步法、Trizol法和使用标准RNA分离试剂盒。抽提的关键是尽量减少RNA酶的污染，为减少假阳性，相比较的样品在同一条件下应用同种方法同时抽提，抽提的总RNA在反转录前必需经过脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNaseⅠ）充分消化，可设立不加反转录酶的对照来检验DNA是否被去除。紫外分光光度仪测其纯度，甲醛变性凝胶电泳测其完整性，28sRN ...

免疫PCR主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定过程；第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中，首先用待测抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相应的特异抗体，于是抗体就与固相上的抗原结合形成抗原抗体复合物，蛋白A-链亲合素（Protein A-Streptavidin）嵌合体（重组融合蛋白）中的 ...