PCR技术原理

Amberg Lab ,Upstate Medical University PCR.html"http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/fusion_PCR.html1) In separate PCR reactions, amplify the 5' and 3' ends of the gene of interest with primers about 200 bases apart. Primer 2 should begin with 24 nts complementary to the ...

PCR用于进化分析 　　进化遗传学具有两个并列的研究方向：系统发育的重建和种群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志 现存物种分化的时间以来，各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内， 同功酶的电泳分析、免疫学比较和蛋白质序列分析被广泛地应用。而最近，DNA-DNA 杂交和核糖体RNA序列分析为分类学做出了重要贡献。这些技术大多有局限性，因为 它们是估计 ...

Amberg Lab ,Upstate Medical University http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/colony_pcr.htmlThis procedure will work for both yeast and E. coli:Take a small colony and suspend it in 5ul of H2O in a PCR tube. Heat for 5 min at 95¡C and then spin the condensation down in a microfuge. Set up ...

The Preuss Lab,The Division of Biological Sciences,The University of Chicago PCR.html"http://preuss.bsd.uchicago.edu/protocols/PCR.html 上一篇：TAIL PCR Protocol 下一篇：RT-PCR Protocol

用PCR、GC发夹及变性梯度 凝胶电泳检测突变 　　变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时，DNA分子在不同的区域相 对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等，与每 一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的 堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用，因此解链区域的T ...

PCR检测人COX病毒及其应用 　　柯萨奇病毒(Coxsackie viruses简称Cox.病毒)是1948年Dalldorf等采用新生小鼠研究脊髓灰质炎病毒时，在纽约附近的Coxsackie分离发现的一种肠道病毒，属小RNA病毒科，可分为A、B二组.A组有23型(A1-22，24)，B组有6型(B1-6)，与A组的A9型有共同的组特异性抗原.Cox病毒可引起许多不同的临床症侯，甚至同一病毒可以引起不同的疾病(表1)，近年通过P ...

扩增较大片段DNA的PCR方法 一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 　　通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10-4降到10-3，从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0kb片段时，效率比Klentaq l(T ...

PCR在DMS/BMD基因诊断中的应用 　　DMD(Duchenne Muscular Dystrophy)和BMD(Becker Muscular Dystrophy)是一种常见的X连锁隐性遗传病，主要发生于男性，其发病率为1/3500活产男婴，其发生的原因是Dystrophin(抗肌萎缩蛋)其固缺陷所致. 一、DMD/BMD的临床表现 　　在临床上DMD较BMD常见，发病早，症状重，正常于2-3岁即出现骨骼肌无力的表现，一般从骨盒带肌肉无力开始而 ...

A组轮状病毒感染的诊断 　　在腹泻病的病毒病因中，轮状病毒(Rotavirus简称RV)为主要病因，在经济发达国家，急性胃肠炎住院的婴幼儿中约1/3-1/2以上是轮状病毒腹泻，而在发展中国家，腹泻病每年造成500-1000万婴幼儿死亡，轮状病毒为主要病因，在我国，情况更加严重，我国不仅与世界其李国家要样遭受婴功儿(即A组)轮状病毒的危害，而且还受到成人腹泻轮状病毒Adult Diarrhea Rotavirus即ARV，B组)爆发流 ...

单纯疱疹病毒感染的诊断方法　　单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)属于疱疹病毒科(herpes viridae).疱疹病毒科是一群中等大小的双链DNA病毒，有100个以上成员，根据理化性质分为α、β、γ三个疱疹病毒亚科.疱疹病毒感染的宿主范围极为广泛，可感染人类和其他脊椎动物，包括哺乳类、鱼类、两栖类、鸟类、有袋类等.疱疹病毒主要侵犯外胚层来源的组织，包括皮肤、粘膜和神经组织.疱疹病毒感染部位和引起的疾病多 ...

梅毒螺旋体感染的诊断方法一、微生物流行病学概况及主要临床表现　　梅毒(Syhillis)是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)引起的一种慢性全身性传染病.一经传染，螺旋体很快播散到全身，几乎可侵犯人体各器官，表现多种多样的类似很多疾病的临床表现，同时常时隐时现，病情变化难测，很容易造成误诊和漏诊.最早发现和论述梅毒病人的是在北美.一般认为梅毒起源于美洲.哥伦布的水手于1943年在北美染上梅毒后带回西班牙，很 ...

PCR技术在遗传病诊断中的应用 　　自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRNA. 　　传统的基因诊断技术主要是以基因探针技术为基础而建立的一些检测方法，包括 Southerninnouthe ...

PCR技术在血友病A基因 诊断中的应用 　　血友病A是常见的遗传性凝血障碍，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能异 常的致其发病率改为1/1000男性，女性患者极为少见.在临床上，血友病大都有家族 史，亦有约20～30%的患者为散发病例，为新生基因突变所致. 一、血友病的遗传学 　　本病为X连锁隐性遗传病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全长约为186Kb， 包括26个外显子和25个内含子，其mRNA全长约为9Kb，CDNA占为9009bp.其 ...

1．SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。2．Taqman探针：也称为水解寡核苷酸探针。该探针在5’端标记报告荧光基团，在3’端标记淬灭荧光基团，在探针完整时报告荧光基团发出的荧光被淬灭荧光基 ...

mid DNA Templates for Use in Quantitative PCR .pdf (286.05k) 上一篇：TaqMan PCR以及ABI-7700的简单介绍 下一篇：定量PCR技术简介

ABI PRISM® 7700 Sequence Detection SystemIntegrates a PCR-based assay with laser scanning technology to excite fluorescent dyes present in the specially designed TaqMan® probes. It is a fully integrated system for real-time detection of PCR. The system includes a built-in thermal cycl ...

whitehead institute center for microarray technology(WICMT),MITABI7000 use notes ，131k，word文档http://www.wi.mit.edu/CMT/protocols/ABI7000RT_vCMT1.docPrimer Express ,96页，PDF格式http://www.wi.mit.edu/CMT/protocols/ABI7000RT_vCMT1.docSYBR® Gr ...

实时荧光定量PCRcoolautumn　　在使用荧光进行PCR定量时，荧光信号与产物模板数成一一对应的关系，检测荧光的信号就可以对PCR产物定量。但是，在使用终点法测定的重复性并不好。由此PE公司于1996年发明了实时荧光定量PCR，临测每个循环的荧光强度，并使用Ct值进行分析，很快得到大家的接受，广为应用。　　下图是PE公司在同一台PCR仪上对相同模板进行96次扩增的扩增曲线图。　由图可以看到当扩增越靠后定量的重复性就越差 ...

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One of the most used quantification methods in PCR is the "delta-delta Ct" method. In this method we use the Ct-value given from the fixed threshold value and detected product of the PCR-reaction.To me it seems that the "Ct-value" is a exponetial value. Is this right? Does anyone have any comment on this? -nev ...